 合成长链或短链 RNA 转录产物

NEB HiScribe T7 高效 RNA 合成试剂盒可在体外高效合成多种类型的 RNA，包括内部标记的RNA 及共转录带帽结构 RNA。利用 T7 RNA 聚合酶，该试剂盒可以从少量样本得到高效转录，单次反应可获得高达 180 μg 的产物，或利用帽类似物合成带帽 RNA，产量高达 30-40 μg。利用该试剂盒得到的 RNA 适用于多种下游应用，如 RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗等。

 – T7 RNA 聚合酶混合液

 合成长链或短链 RNA 转录产物

NEB HiScribe T7 高效 RNA 合成试剂盒可在体外高效合成多种类型的 RNA，包括内部标记的RNA 及共转录带帽结构 RNA。利用 T7 RNA 聚合酶，该试剂盒可以从少量样本得到高效转录，单次反应可获得高达 180 μg 的产物，或利用帽类似物合成带帽 RNA，产量高达 30-40 μg。利用该试剂盒得到的 RNA 适用于多种下游应用，如 RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗等。

DNase I（无 RNase）
RNA 上样染料（2X）

 合成长链或短链 RNA 转录产物

HiScribe SP6 RNA 合成试剂盒利用 SP6 RNA 聚合酶进行 RNA 体外转录。该试剂盒适用于高效合成 RNA 转录子，并可引入帽类似物（试剂盒中不包含）或经修饰的核苷酸（试剂盒中不包含）以获得带帽、生物素标记或染料标记的 RNA。试剂盒同样适用于合成高比活的放射性 RNA 作为探针或靶标。

 – SP6 反应缓冲液（10X）

 DNase I（不含 RNase）

·使用 1 µg 对照模板，单次反应可转录高达 90 µg Cap-1 mRNA

 对于大多数真核生物来说，mRNA 需要 5’端带有 7-甲基鸟苷（m7G）帽结构，3’端带有 poly（A）尾才能有效翻译。HiScribe^™ T7 mRNA合成试剂盒（含 CleanCap^® Reagent AG）优化了 RNA 合成配方，利用三核苷酸帽结构类似物技术，通过一步共转录加帽即可获得带有天然的 Cap-1 结构的 mRNA，且不会影响 RNA 产量。使用含 T7 启动子序列、AG 起始的目标序列和 poly（A）尾编码序列的 DNA 模板，即可转录带有 5’-m7G Cap-1 和 poly（A）尾的 mRNA，该 mRNA 能够有效翻译并能逃避细胞先天免疫反应。

T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体，可将目的基因序列克隆到 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中，以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。用 T7 和 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 具有 mRNA 的生物特性，可进行准确剪切。实验证实，用靶标 DNA 反向转录所产生的反义 RNA 能特异性阻断体内 mRNA 的翻译。由于RNA/DNA 杂交体比 RNA/RNA 和 DNA/DNA 杂交体更稳定，因此核酸杂交反应中的检测信号会更强。

SP6 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带克隆于 Salmonella typhimurium LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。 T7 RNA 聚合酶来自重组 E.coli BL21 菌株，该菌株携带含可诱导的 lac UV5 启动子及其控制的 T7 基因 I 的 pAR1219 载体。T3 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带可表达T3 基因载体。

1X RNAPol 反应缓冲液 [40 mM Tris-HCl（pH 7.9），6 mM MgCl₂， 2 mM 亚精胺，1 mM DTT］。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP（不随酶提供）和带有启动子的模板 DNA，在 37 ℃ 温育。

无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。 

1 单位指在 37℃ 条件下， 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。

T3 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶：20,000 units/ml。 

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体，可将目的基因序列克隆到 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中，以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。用 T7 和 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 具有 mRNA 的生物特性，可进行准确剪切。实验证实，用靶标 DNA 反向转录所产生的反义 RNA 能特异性阻断体内 mRNA 的翻译。由于RNA/DNA 杂交体比 RNA/RNA 和 DNA/DNA 杂交体更稳定，因此核酸杂交反应中的检测信号会更强。

SP6 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带克隆于 Salmonella typhimurium LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。 T7 RNA 聚合酶来自重组 E.coli BL21 菌株，该菌株携带含可诱导的 lac UV5 启动子及其控制的 T7 基因 I 的 pAR1219 载体。T3 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带可表达T3 基因载体。

1X RNAPol 反应缓冲液 [40 mM Tris-HCl（pH 7.9），6 mM MgCl₂， 2 mM 亚精胺，1 mM DTT］。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP（不随酶提供）和带有启动子的模板 DNA，在 37 ℃ 温育。

无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。 

1 单位指在 37℃ 条件下， 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。

T3 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶：20,000 units/ml。 

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

  增强 DNA 复制

无机焦磷酸酶（PPase）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。
P₂0₇^–4 + H₂0 → 2HP0₄^–2

重组 E. coli 菌株，携带从极度耐热的 Thermococus litoralis 中克隆的无机焦磷酸酶基因。 

1 单位指标准反应条件下 [0.5 ml 反应体系，50 mM Tricine（pH 8.5），1 mM MgCl₂ 和 0.32 mM PPi，75℃ 反应 10 分钟]，每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐的酶量。 

2,000 units/ml。 

无 RNase 污染。 

2,000 units/ml。 

1,000,000 units/ml

 使用 T7 噬菌体启动子进行体外转录

Ÿ   该产品为高浓度版本的 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）

Ÿ   适用于有经验的体外转录用户

Ÿ   随产品提供 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁

 T7 RNA 聚合酶（高浓度）的浓度为标准 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）的 20 倍，是希望自己建立和优化体外转录反应体系的有经验用户的理想选择。该酶配有 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁溶液，可进一步调试不同条件，例如核苷酸浓度。

 yDcpS 是脱帽酶，来源于酿酒酵母（S. cerevisiae），可水解 mRNAm7G 帽结构中 gamma 和 beta 位磷酸基团之间的磷酸二酯键，产物为二磷酸化的 5’末端和 m7GMP。yDcpS 可使全长 mRNA 脱帽，留下的 5’二磷酸末端可用牛痘病毒加帽酶重新加帽。

 1X yDcpS 反应缓冲液，37℃ 温育。

 200,000 units/ml

 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶适合在较高温度下进行体外转录，在 37-56℃ 有活性

Ÿ   使用 T7 噬菌体启动子进行体外转录

Ÿ   该产品为高浓度版本的 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（NEB＃M0658）

Ÿ   使用帽类似物时，提高共转录的加帽效率

Ÿ   由于减少了 dsRNA 副产物的形成，从而使高温合成 RNA 的免疫原性降低

Ÿ   适用于有经验的体外转录用户

Ÿ   随产品带有 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁

 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（高浓度）的浓度为标准 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（NEB＃M0658）的 20 倍，是希望自己建立和优化体外转录反应体系的有经验用户的理想选择。该酶配有 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁溶液，可进一步调试不同条件，例如核苷酸浓度。

体外转录除了 RNA 聚合酶外还涉及多种成分，包括核糖核苷酸、无机焦磷酸酶和 RNase 抑制剂，这些均可单独购买。详细信息请参考“相关产品”部分。

Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶是一种经基因工程改造的 DNA 依赖性 RNA 聚合酶，对 T7 噬菌体启动子具有高度特异性，跟野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比，它可在更高的温度下进行反应。Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶的最佳温度为 50-52°C。 

在更高的体外转录反应温度下，Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（高浓度）减少了 dsRNA 副产物

使用 dsRNA 抗体（J2）进行免疫印记实验显示：在 37℃ 进行体外转录实验时，T7 和 Hi-T7 的转录产物均含有 dsRNA 副产物，HPLC 纯化可消除体外转录 RNA 中的 dsRNA 副产物。在 50℃ 条件下使用 Hi-T7 进行体外转录实验时，dsRNA 副产物明显减少。

产品来源

来源于 E.coli 菌株，携带经基因工程改造的 T7 RNA 聚合酶基因。

 Ÿ   mRNA 用于体外翻译、显微注射以及转染

Ÿ   放射标记的 RNA 探针

Ÿ   非同位素 RNA 标记

Ÿ   靶基因的向导 RNA

Ÿ   RNA 的结构、加工以及催化作用的研究

Ÿ   基因表达实验中的反义 RNA

Ÿ   RNA 扩增

Ÿ   等温扩增

·耐盐型 DNA 特异性核酸内切酶

·用于降解双链和单链 DNA

·产生具有 5′-磷酸和 3′-羟基末端的短链寡核苷酸

·不含 RNase 

    DNase I-XT（耐盐）特别适用于：

·降解体外转录反应中的 DNA 模板

·去除 RNA 样品中残留的基因组 DNA

 DNase I-XT（耐盐）是基于 DNase I 改造的耐盐型 DNA 核酸内切酶，可非特异切割 DNA，产生具有 5′-磷酸和 3′-羟基末端的二核苷酸、三核苷酸和寡核苷酸产物 (1,2)。DNase I-XT（耐盐）作用于单/双链 DNA、染色体，以及 RNA:DNA 杂交链上的 DNA。当盐浓度>50 mM 时，不耐盐型 DNase I（无 RNase）（NEB #M0303）的活性会受到抑制，但 DNase I-XT（耐盐）（NEB #M0570）在 50-100 mM 盐浓度范围活性最佳，盐浓度达到 200 mM 时，可维持 65% 活性，300 mM 时，仍有~40% 活性。

图 1：DNase I-XT（耐盐）在盐浓度> 100 mM，能高效降解 DNA

在等摩尔的 DNase I (NEB #M0303) 和 DNase I-XT（耐盐）(NEB #M0570) DNase 活性比较中，DNase I-XT（耐盐）展示出更高的耐盐特性。检测方法为：在 1X DNase I 反应缓冲液中，消化标记有荧光和淬灭基团的发夹 dsDNA 底物（35 nt），荧光强度反映出不同盐浓度条件下的酶活（如图所示）。结果显示：DNase I 活性随着盐浓度的增加而下降，而耐盐的 DNase I-XT 在高达 300 mM 盐浓度中仍保持活性。

图 2：DNase I-XT（耐盐）能够更完全的去除 IVT 反应和 RNA 中的 DNA 

20 μl 体外转录产物用以下三种方法检测去除残留 DNA 的效果：1) 无 DNase I；2) 2 U TURBO^® DNase 或 3) 2 U DNase I-XT（耐盐），37°C 条件下孵育 15 分钟。分别使用 Monarch RNA 纯化试剂盒（500 µg）（NEB #T2050）纯化，以无核酸酶水（50 µl）洗脱。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB #M3004）通过 qPCR 检测 DNA 残留水平。将每个样品的平均 Cq 值与标准曲线（灰色）进行比较，以评估可 PCR-扩增 DNA 的百分比。TURBO DNase 和 DNase I-XT（耐盐）的使用都不需要对 IVT 反应产物进行稀释，但是，DNase I-XT（耐盐）对 IVT 反应中的 DNA 模板去除更彻底，难以通过 qPCR 检测到。

图 3：DNase I-XT（耐盐）有效去除 RNA 粗提产物中的残留 DNA

RNA 粗提样本用以下四种方法检测去除残留 DNA 的效果：1) 无 DNase I；2) 在 DNase I-XT 反应缓冲液中加入 DNase I-XT（耐盐）(2 U, NEB #M0570)；3) 在 DNase I 反应缓冲液中加入 DNase I (2 U, NEB #M0303)；4) 在 TURBO DNase 反应缓冲液中加入 TURBO DNase (2 U, ThermoFisher) ，37°C 条件下孵育 15 分钟。使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒 (NEB #E3005) 和人类或小鼠 Actin 外显子引物，通过（+/- RT）qPCR 检测对残留的基因组 DNA (gDNA) 进行定量。以 qPCR（无反转录，仅扩增DNA）与 RT-qPCR（有反转录，同时扩增 DNA 和 RNA）平均 Cq 值的差值评估 DNase 去除 DNA 的效果。结果显示：对于 RNA 粗提产物中的残留 gDNA，DNase I-XT（耐盐）比 TURBO DNase 去除效果更彻底。

 1X RNAPol 反应缓冲液。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP（不随酶提供）和带有启动子的模板 DNA。于 37℃（ T3、T7 和 SP6 ）或 50℃（Hi-T7）条件下温育。

 T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体，可将目的基因序列克隆到T3、 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中，以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。

 1 单位指在 37℃或 50℃（Hi-T7）条件下，1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或www.neb.com。

 T3 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶：20,000 units/ml； Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶：50,000 units/ml。

小鼠 RNase 抑制剂

10,000 units/ml。 

3´ -脱硫生物素标记 GTP 中无 RNase 和切刻酶污染。

表中所描述的连接方法都有过报道，但可能需要进一步优化。 

无核酸内切酶、核酸外切酶污染。

T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201）还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶（NEB #M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。 

重组 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶基因。 

达到最佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力）。 

放射性标记反应：50 μl 反应体系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。

CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。

DNA 或 RNA 磷酸化反应（放射性和非放射性）操作流程请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟，然后冰上冷却，并加入 5%（w/v）的 PEG-8,000。

T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。

T4 多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

1 单位即 1 个 Richardson 单位，指 37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [³²P] 掺入所需要的酶量（1）。

10,000 units/ml。 

关于该酶性质和产品应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。 

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。 

pCp 的连接需要加入终浓度为10%（v/v）的 DMSO。 

10,000 或 30,000 units/ml。 

10,000 units/ml。 

200,000 units/ml。 

无核酸内切酶、核酸外切酶污染

50,000 units/ml。 

无核酸内切酶和核酸外切酶污染。 

2,000 units/ml。 

无核酸内切酶和外切酶污染。 

5,000 units/ml。 

5,000 units/ml。 

与 0.1% SDS 一起温育足以失活 RNase HII。 

 请注意：该产品已停产，库存售完为止，替代产品为M0525

小牛肠碱性磷酸酶（CIP）催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外，CIP 水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。CIP 在分子生物学研究中应用广泛，如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团，用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中，对线性载体去磷酸化，防止自连。该酶可以作用于 5´ 突出端、凹陷端和平末端。CIP 也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP，用于制备测序模板和 SNP 分析。 

 小牛肠粘膜。

小牛肠碱性磷酸酶（CIP）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

1 单位指在 1 ml 反应体系中，37℃ 条件下，1 分钟催化 1 μmol 的对硝基苯磷酸盐（PNPP）水解成对硝基苯酚所需的酶量。

10,000 units/ml。 

关于该酶性质和产品应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。 

无核酸内切酶、核酸外切酶污染。 

5,000 units/ml。 

5´ 去腺苷化酶是由酿酒酵母（S. cerevisiae）的 HNT3基因编码。 NEB 研究显示该蛋白能从 DNA 和 RNA的 5´ 末端去腺苷化，余下 5´ 末端磷酸。它也能切割 AppppA 生成 ATP 和 AMP。未检测出其对 lysylAMP 有作用。

50,000 units/ml。 

通用 miRNA 克隆接头

T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（NEB#M0242）的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性， K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。

因为不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中，优化了接头的连接过程。

200,000 units/ml。 

纯化自携带有 RppH 基因的 E. coli 菌株。 

10X NEBuffer 2。 

5,000 units/ml。 

T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（NEB#M0242）的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性， K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
因为不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中，优化了接头的连接过程。

重组 E. coli 菌株，携带有 MBP 融合表达的质粒，该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 和 位置进行了突变，精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000 

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头（NEB #S1315）] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。 

200,000 units/ml。 

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。 

催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成，使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接，伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。 

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。 

pCp 的连接需要加入终浓度为10%（v/v）的 DMSO。 

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP（NEB #M0204中包含）或 100 mM ATP（NEB #M0437中包含）50% PEG 8000 

无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。 

1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[³²P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。

10,000 或 30,000 units/ml。 

有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。 

连接单链 RNA 或单链 DNA 的 3´ -磷酸基团或 2´ ,3´ -环磷酸基团连接到单链 RNA 的 5´ -羟基上

 含有匹配末端的单链 RNA 环化

来源于 E. coli 的 RtcB 连接酶能将单链线性RNA 分子中的 3´ -磷酸基或 2´ , 3´ -环磷酸基团与另一个 RNA 分子的 5´ -羟基进行连接。连接反应需有 GTP 和 MnCl2 的参与，并在反应过程中会形成反应中间体-鸟苷酸。如底物末端含有 2´ , 3´ -环磷酸基团，需先行水解成 3´ -磷酸基，然后再通过 GMP 进行 3´ 末端活化和连接。

重组 E. coli 菌株，携带有 His 标签的 RtcB 连接酶基因。

1X RtcB 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH8.3 @ 2℃), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT]，补加0.1 mM GTP 和 1 mM MnCl2。 37℃ 温育。

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

15 μM

 有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

 耐热 RNaseH 特异性识别并切割 RNA-DNA 杂交体中 RNA 序列的磷酸二酯键，同时保持DNA 序列完整。这种热稳定的核酸酶具有与大肠杆菌 RNaseH 相同的酶学性质，但在更高的温度下具有活性。

 Ÿ   Sce PUS1 用于在体外将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶

Ÿ   Sce PUS1 是一款独立的酶，不需要 RNA 向导或辅助因子即可修饰 RNA

Ÿ   使用 Sce PUS1 对特定序列进行假尿苷修饰可以替代通过 RNA 聚合酶随机掺入修饰核苷酸的方法

 该酶是创新酶（Enzyme for Innovation, EFI）。创新酶工程由 NEB 发起，旨在为科研界提供独一无二的酶，从而为新的创新应用的发现创造条件。这些酶均具有独特的功能和特性。

Sce 假尿嘧啶合成酶 I（Sce PUS1）可将单链 RNA 中尿嘧啶转化为假尿嘧啶，对单链 RNA 中尿嘧啶的转化率高于双链 RNA。最佳底物为≥15 nt无特殊结构的 RNA。

 NudC 是 NUDIX 焦磷酸酶家族中的一员，可高效水解带 NAD⁺ 帽 和 NADH 帽的 RNA，生成连接可用的带 5′ 单磷酸末端的 RNA（NAD⁺ 脱帽或去除 NAD）^（1）。研究表明：nudC 基因的缺失增加了大肠杆菌中 NAD⁺ 帽化 RNA 的比例^（2）。

该产品已停产，推荐替代产品为 NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒（NEB#E7760）或 NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠（NEB#E7770）。

 –  RNA Sample Preparation
–  Second Strand Synthesis of cDNA

The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module has been optimized to generate double-stranded cDNA from first-strand cDNA, as part of the NEBNext non-directional RNA library preparation workflow. 

The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module is Designed for Use with the

Following:

 –  NEBNext Ultra II RNA First Strand Synthesis Module (NEB #E7771)

 –  NEBNext Ultra II End Repair/dA-Tailing Module (NEB #E7546)

 –  NEBNext Ultra II Ligation Module (NEB #E7595)

 –  NEBNext Ultra™ II Q5^® Master Mix (NEB #M0544)

 –  NEBNext^® Oligos for Illumina^® (NEB #E7335, #E7500, #E7710, #E7730, #E6609, #E7600,

    #E7535,  #E7350)

NEBNext^® Second Strand Synthesis Enzyme Mix

NEBNext^® Second Strand Synthesis Reaction Buffer

The NEBNext® Magnesium RNA Fragmentation Module has been optimized to fragment RNA into small

pieces by incubation with Magnesium ions at 94˚C. Fragment size is controlled by incubation time (Figure 1), and the reaction is ended by the addition of NEBNext Fragmentation Stop Solution.

  NEBNext® RNA Fragmentation Buffer

  NEBNext RNA Fragmentation Stop Solution

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 2

 ssDNA 接头腺苷酸化的客户，请选用 5´ DNA 腺苷化试剂盒

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 1

NEBNext Small RNA 多样本文库制备试剂盒 2

ssDNA 接头腺苷酸化的客户，请选用 5´ DNA 腺苷化试剂盒

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。

  –  Accurate retention of transcript strand of origin information

–  Utilizes dUTP-based methodology

–  Low input amounts (as low as 10ng purified mRNA or ribosomal-depleted RNA, or 100ng Total RNA)

–  Fast workflow (4.5 – 5 hours), with minimal hands-on time

–  Robust, reliable performance

–  Ultra high fidelity amplification with minimized GC bias

The NEBNext® Ultra™ Directional RNA Library Prep Kit for Illumina® contains reagents for preparation of strand-specific RNA libraries for Illumina sequencing. Please note that adaptors, primers, rRNA depletion

reagents and poly(A) mRNA isolation reagents are not included in the kit and are available separately.

Ultra Directional RNA Library Preparation for Illumina

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块可以从分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)⁺ RNA。这个技术的原理是将 Oligod(T)₂₅ 与 1 μm 顺磁性磁珠偶联后，以此为固相支持物直接结合 poly(A)⁺ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离，也适用于自动化高通量分离。此外，磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液，不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA分布特性的完整 poly(A)⁺ RNA。

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。 

 –  Low input amounts (as low as 10ng total RNA, purified mRNA or ribosomal-depleted RNA)

 –  Fast workflow (5 – 5.5 hours), with minimal hands-on time

 –  Robust, reliable performance

 –  Ultra high fidelity amplification with minimized GC bias

The NEBNext® Ultra™ RNA Library Prep Kit for Illumina® contains reagents for preparation of non-directional RNA libraries for Illumina sequencing. Please note that adaptors, primers, rRNA depletion reagents and poly(A) mRNA isolation reagents are not included in the kit and are available separately.

Ultra Non-directional RNA Library Preparation for Illumina

 ssDNA 接头腺苷酸化的客户，请选用 5´ DNA 腺苷化试剂盒

每个试剂盒都通过对基因组 DNA、ChIP DNA 和 mRNA 进行文库构建，并在 Illumina 平台测序进行验证。 

NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒

NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠

NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒

NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠

 在您的 RNA 测序实验中，是否对灵敏度和特异性有更高的要求？您的测序反应中是否有起始 RNA样本量非常低的情况？为了应对这些挑战，我们的二代测序 RNA 文库制备试剂盒在流程的每一步上都进行了配方的优化，使文库产量得到成倍的增长、起始样本量要求更低、PCR 循环数更少。这些试剂盒工作流程经过改进，更加适合于自动化操作。既有定向（链特异性，使用“dUTP 方法”）文库制备，又有非定向文库制备，还可提供 SPRISelect 磁珠进行片段筛选和纯化。

 NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒

NEBNext Ultra II RNA 定向文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠

NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒

NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠

在您的 RNA 测序实验中，是否对灵敏度和特异性有更高的要求？您的测序反应中是否有起始 RNA样本量非常低的情况？为了应对这些挑战，我们的二代测序 RNA 文库制备试剂盒在流程的每一步上都进行了配方的优化，使文库产量得到成倍的增长、起始样本量要求更低、PCR 循环数更少。这些试剂盒工作流程经过改进，更加适合于自动化操作。既有定向（链特异性，使用“dUTP 方法”）文库制备，又有非定向文库制备，还可提供 SPRISelect 磁珠进行片段筛选和纯化。