AGL1 农杆菌电转感受态细胞:我司生物提供的AGL1电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞
AGL1菌株;农杆菌感受态细胞;Rifampicin(Rif) 利福平;Kanamycin(kan)卡那霉素; EHA101;LBA4404;GV3101;植物转基因研究;
货号 |
产品名称 |
规格 |
|
MF2310-0500UL
|
AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 |
10×50μl
|
|
MF2310-2500UL |
AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 |
50×50μl |
|
AGL1菌株的染色体背景为C58,RecA,核基因含利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。AGL1菌株适用于拟南芥、水稻、杨树等植物的转基因操作。
组分编号 |
组分名称 |
货号(规格)
|
MF2310-0500UL |
MF2310-2500UL |
MF2310-A |
AGL1 Electrocompetent cell |
10×50μl |
50×50μl |
MF2310-B |
pCAMBIA2301 对照载体 (10ng/μl) |
10μl |
10μl |
注意事项
1) 感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2) 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3) 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
4) 为确保zui高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。
5) 转化高浓度的质粒可相应减少zui终涂板用量。
6) 平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。
7) 利福平浓度应≤25μg/ml,过高浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。我司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含50μg/ml卡那霉素,若所用平板含20μg/ml 利福平,则转化效率降低到1/2。
8) 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但这些筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些筛选抗生素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。
9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 将0.1 cm店击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。
2) 取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。
3) 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞–质粒之后快速转移到店击杯中,盖上杯盖,空管保留待用注意:由于感受态转化效率较高,*次使用做预试验确定zui加的质粒用量。
4) 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将店击杯快速放入电转槽中,店击完成快速插入冰中。
5) 加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,于28℃振荡培养2~3h。
6) 6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养2-3天。注意:当平板只含转化所用双元载体抗生素时,28℃培养48h即可;当平板中加入双元载体抗生素的同时,再加入20μg/ml 利福平时,需28℃培养60h;若使用的平板含50μg/ml 利福平,需在28℃培养72-90h。
相关产品感受态细胞系列
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
MF2306-0500UL
|
EHA101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 |
10×50μl |
MF2307-0500UL
|
EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 |
10×50μl |
MF2308-0500UL |
LBA4404 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 |
10×50μl |
MF2309-0500UL |
GV3101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 |
10×50μl |
MF2310-0500UL
|
AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 |
10×50μl |
MF2301-1000UL
|
EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 |
10×100μl |
MF2302-1000UL |
EHA105 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 |
10×100μl |
MF2303-1000UL
|
LBA4404 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 |
10×100μl |
MF2305-1000UL
|
AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 |
10×100μl |
MF2304-1000UL |
GV3101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 |
10×100μl |
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
MS0014-1G
|
Rifampicin, USP Grade 利福平 |
1g |
MS0014-5G |
Rifampicin, USP Grade 利福平 |
5g |
MS0016-5G
|
Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观霉素二妍酸盐五水合物 |
5g |
MS0016-25G |
Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观霉素二妍酸盐五水合物 |
25g |
MS0017-5G
|
Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 |
5g |
MS0017-25G |
Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 |
25g |
MS0019-10G
|
Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 |
10g |
MS0019-25G |
Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 |
25g |
MS0025-1G
|
Gentamycin Sulfate Salt 硫酸庆大霉素 |
1g |
MS0023-25G
|
Streptomycin Sulfate, USP Grade 硫酸链霉素 |
25g |
组分Component
|
LB(液体)/升
|
LB(固体)/升
|
胰蛋白胨 Tryptone
|
10g
|
10g
|
酵母提取物 Yeast extract
|
5g
|
5g
|
氯化钠 NaCl
|
10g
|
10g
|
1N NaOH
|
调整pH至7.0
|
调整pH至7.0
|
琼脂 Agar
|
/
|
15g
|
附表2 固体和液体YEB培养基配方
组分Component
|
YEB(液体)/升
|
YEB(固体)/升
|
胰蛋白胨 Tryptone
|
5g
|
5g
|
酵母提取物 Yeast extract
|
1g
|
1g
|
牛肉浸膏 Beef Extract
|
5g
|
5g
|
蔗糖 Sucrose
|
5g
|
5g
|
七水硫酸镁 MgSO4·7H2O
|
0.49g
|
0.49g
|
1N NaOH
|
调整pH至7.0
|
调整pH至7.0
|
琼脂 Agar
|
/
|
15g
|
附表3常见农杆菌对抗生素敏感性总表
农杆菌菌株
|
羧苄(carb)
|
链霉素(strep)
|
利福平(rif)
|
庆大霉素(gent)
|
卡那霉素(kan)
|
EHA101
|
S
|
S
|
R
|
S
|
R
|
EHA105
|
S
|
S
|
R
|
S
|
S
|
LBA4404
|
S
|
R
|
R
|
S
|
S
|
GV3101
|
S
|
S
|
R
|
R
|
S
|
AGL1
|
R
|
S
|
R
|
S
|
S
|
备注:S代表敏感,R代表抗性。
|
AGL1 农杆菌电转感受态细胞 AGL1 农杆菌电转感受态细胞