产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶
5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶
#M0319L
50 次反应
#M0319S
10 次反应
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通用 miRNA 克隆接头
特性
二代测序文库构建中连接单链 DNA 和腺苷化的 DNA 接头
构建 small RNA 二代测序文库时，可在较高温度下连接预腺苷化的接头和 RNA
构建 small RNA 二代测序文库时，可在较高温度下连接预腺苷化的接头和 RNA
概述
5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶来自嗜热碱甲烷杆菌（Methanobacterium thermoautotrophicum），是 RNA 连接酶催化亚基的赖氨酸点突变体。该酶连接时不需要 ATP，但需要 5´ 预腺苷化的接头才能将其连接到 RNA 或单链 DNA 的 3´ OH 末端。该酶也可催化 3´ 端被 2´ -O-甲基化的 RNA 和 5´ 预腺苷化接头的连接反应。连接反应的最适反应温度为 60-65℃。连接酶的点突变体不能使 RNA 或单链 DNA 的 5´ 端磷酸腺苷化，因此降低非特异性的串联和环化。
该酶能在 65℃ 反应，此温度下降低了 RNA 二级结构对连接反应的制约。
来源
重组 E. coli 菌株，携带有 His 标签的 5´ AppDNA/RNA 连接酶基因。
反应条件
1X NEBuffer 1 [10 mM Bis-Tris-Propane-HCl (pH 7.0 @ 25℃)，10 mM MgCl2，1 mM DTT]，65℃ 温育。
质保声明
无单链和双链 DNA 核酸内切酶、核酸外切酶、 RNase 和磷酸酶污染。
浓度
20 μM。
使用注意事项
建议连接单链 DNA 和预腺苷酸化接头时，使用含镁离子的 NEBuffer 1。