Y187 Chemically Competent Cell,酵母菌化学感受态细胞

Y187 Chemically Competent Cell

酵母菌化学感受态细胞

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品包装

产品描述

Y187是GAL4系统酵母单杂交/双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒或与MATa型酵母菌株（如Y2HGold，AH109等）通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y187-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp1，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y187有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种完全异源的Gal4反应启动元件-G1，M1操控，这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y187酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met-, gal80Δ, URA3:: GAL1_UAS^–Gal1_TATA^–– lacZ, MEL1

注意事项

1.在冰上融化感受态细胞。

2.转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3.Y187对高温敏感，zui适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4.菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5.酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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