酵母双杂交用甘油菌 克隆与表达分析

AH109 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

AH109是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，来源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ报告基因从而产生AH109。

AH109是MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。AH109-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1调控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同。这一特征有效缩减假阳性发生的概率。因为，任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列，激活4个报告基因表达。

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1_UAS^–Gal1_TATA^–His3, MEL1GAL2_UAS^– Gal2_TATA^–Ade2, URA3::MEL1_UAS^–MEL1_TATA- lacZ

基本信息

培养基：YPDA

培养条件：28℃，YPDA，有氧培养

保存方式：30%甘油，-20℃保存

转化方式：PEG/LiAC；电转；

基本应用：酵母双杂交实验

使用说明

生物提供的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证，如存在质量问题，请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后，请及时在固体平板上划线培养，挑取单菌落接种到液体培养基中，震荡培养后使用并保存新的甘油菌。

注意事项

1/使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可；也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。

2/为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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