KK2620,KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增(ReadyMix+引物)

2022年7月6日 作者 jinpanbio

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

产品描述

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

                                        KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

  KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

  1、产品应用

  高效、高保真、低偏好扩增测序前的文库,主要包括:

  (1)全基因组鸟枪法测序

  (2)靶标测序(捕获前/后扩增)

  (3)扩增子测序

  (4)ChIP测序

  (5)RNA测序

  2、技术优势

  (1)提高基因组中高GC或高AT区域的扩增效率;

  (2)降低扩增偏好性从而提高测序覆盖度;

  (3)具有行业领先的工业级保真性。

  3、优异表现

  (1)高GC含量对于使用普通具有校正功能(proof-reading) (B-家族)扩增酶扩增的文库在测序读深中的影响

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

  (2)根据文库扩增所用的扩增酶的不同,低GC含量的文库会产生不同的扩增偏好性

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

  上图:采用相同的物理打断的 P.falciparum(恶性疟原虫,AT含量65%)gDNA制备的文库用图中所示的PCR试剂(KAPA HiFi,Phusion®)分别进行扩增,然后与没有进行扩增的同等文库进行比较。不同条件下测序read的观察到的不同GC含量的频率如图中曲线所示(黑色=没有扩增;绿色=KAPA HiFi热启动Master Mix;蓝色=Phusion® HF Master Mix)。Reads的期望频率分布为图中灰色阴影区域。未经扩增的文库曲线基本与期望频率分布区域外缘重合。使用KAPAHiFi作为扩增的文库表现出最小的偏差,而使用Phusion®进行扩增的文库中高GC含量的片段,和低GC含量的片段相比,表现出巨大扩增偏差。各文库平均覆盖深度为16.0X(作为对照的未扩增样本);16.5X(KAPA HiFi);18.8X(Phusion®)。以上数据由The Wellcome Trust Sanger Institute,Dr.Michael A.Quail提供。

  (3)文库扩增会极大影响测序覆盖度的一致性

  以下在Artemis的截屏图像描绘了分别使用KAPA HiFi热启动Master Mix、Phusion® HF Master Mix进行文库扩增后,与未进行文库扩增的对照相比,出现的覆盖度偏差。经过上诉不同的扩增途径,无论是高GC含量还是低GC含量的片段,覆盖度偏差的程度也有不同。

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

  上图:P.falciparum(恶性疟原虫)基因组中一7kb片段的覆盖深度和GC含量

  在这段基因组序列中,有3处AT含量>80%,从而导致覆盖度偏差(灰色标注区域)。在这三处高AT区域中,使用PHusion®(蓝色)进行文库扩增后,覆盖深度急剧下降;而使用KAPA HiFi(绿色)进行文库扩增后,三处区域覆盖深度与基因组其他区域统一、一致,而且与没有进行扩增的对照组的覆盖深度结果基本重合。

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

  上图:B.pertussis(百日咳鲍特菌)基因组中一7kb片段的覆盖深度和GC含量

  在这段基因组片段中,有4处GC含量>75%,从而导致覆盖度偏差(灰色标注区域)。在这4处高GC含量区域中,使用PHusion®(蓝色)进行文库扩增后,覆盖深度和未进行扩增的对照相比,急剧下降;而使用KAPA HiFi(绿色)进行文库扩增后,4处区域覆盖深度比较统一、一致,与没有进行扩增的对照组(黑色)的覆盖深度结果相似。

  (4)高保真文库扩增的超高准确性

KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增试剂

  上图:DNA扩增酶(包括混合酶)的错误率KAPA HiFi扩增酶对的错误率/错配率是每覆盖3.54×106 碱基仅出现一个错误(2.82×10-7),错误率比Taq扩增酶低100倍,比基于Taq的混合酶低40倍,比Phusion®低2倍。

  4、产品信息

货号 产品 规格
KK2620 KAPA Library Amplification Kit-with primer mix—Illumina platforms
KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增(ReadyMix+引物)
50反应
KK2621 KAPALibrary Amplification Kitwith primer mix—Illumina platforms
KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增(ReadyMix+引物)
250反应
KK2611 KAPA Library Amplification Kit
KAPA HFi高保真二代测序文库扩增(ReadyMix)
50反应
KK2612 KAPA Library Amplification Kit
KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增(ReadyMix)
250反应
KK2623 KAPA Library Amplification Kit—lllumina platforms
KAPA HiFi高保真二代测序文库扩增(引物)
250反应
KK2702 KAPA Real-Time Library Amplification Kit
KAPA Hii高保真实时文库扩增
250反应