Dojindo,硫生物-HSip-1/1/SB21

2022年5月1日 作者 jinpanbio
Product Description:硫化氢 (H2S) 作为一种生理活性物质在血管舒张、细胞保护和调节胰岛素分泌方面具有重要作用,这一点已被公认。 H2S 被认为是一种气态分子,例如一氧化氮和一氧化碳。 然而,在生理条件下,约 80% 的总硫化物以硫化氢阴离子 (HS-) 的形式存在,因为 pKa 约为 7。此外,HS- 容易转化为各种生化分子,如过硫化物和多硫化物,与巯基反应 活体中的部分。 -SulfoBiotics- HSip-1 是一种新型荧光探针,可选择性检测 H2S,与 H2S 反应时会发出强烈的绿色荧光。 SulfoBiotics-HSip-1 DA 具有细胞膜渗透性,可对细胞内 H2S 进行荧光成像。

Fig. 2 Excitation and emission spectra of HSip-1 reacted with H2S(Em: 491nm/Ex: 516nm)

1. K. Sasakura, K. Hanaoka, N. Shibuya, Y. Mikami, Y. Kimura, T. Komatsu, T. Ueno, T. Terai, H. Kimura, and T. Nagano, “Development of a Highly Selective Fluorescence Probe for Hydrogen Sulfide”, J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 18003.

Quantification of Hydrogen Sulfide in HeLa cells:1. Preparation of Standard CurveTo quantitate the amount of hydrogen sulfide in a sample, A standard curve was derived from the serial dilutions of hydrogen sulfide donor, Sodium Sulfide.1) 用 PBS 稀释 HSip-1 储备溶液 (10 mmol/l) 以制备 200 μmol/l HSip-1 工作溶液。2) 将硫化钠 (-SulfoBiotics- Sodium Sulfide (Na2S), 7.8 mg) 溶解在 1 ml通过氮气鼓泡制备的脱氧 H2O(100 mmol/l Na2S 溶液)。3) 将 Na2S 溶液(100 mmol/l,20 μl)加入 980 μl 脱氧 H2O 中,制备 2 mmol/l Na2S 溶液.4) 将 Na2S 溶液 (2 mmol/l,100 μl) 添加到 900 μl 脱氧 H2O 中,制成 200 μmol/l Na2S 溶液。5) 用脱氧 H2O 稀释 Na2S 溶液 (200 μmol/l)通过连续稀释(200、100、50、25、12.5、6.3、3.2、0 μmol/l)制备各种浓度的 Na2S 溶液。6)将 HSip-1 工作溶液(200 μmol/l,350 μl)加入到300 μl Na2S 溶液并使用涡旋混合器混合。7) 将溶液在室温下孵育 30 分钟,然后将 200 μl 溶液转移到每个孔(96 孔板)中。8) 测量荧光强度在 516 nm (λex=49 1 nm)与酶标仪。

Fig. Fluorescence intensity changes at 516 nm with various concentrations of hydrogen sulfide.

2. Experimental Example with HeLa Cells1) Inoculate HeLa cells in 96-well microplate and incubate the cells in a CO2 incubator overnight.2) Wash the cells with PBS buffer and remove the supernatant.3) Add Lysis buffer * 100 μl to a well and pipet it to lyse cells.4) Add HSip-1 working solution 100 μl to a well and incubate the cells at room temperature for 30 minutes.5) Measure the fluorescence intensity on a plate reader.( Ex: 491 nm, Em: 516 nm)* Lysis buffer: 6 mol/l Urea, 2% SDS, 150 mmol/l Tris-HCl (pH7.4)The hydrogen sulfide concentration was 3 to 9 μmol/l in HeLa cells. The concentration was obtained from the standard curve, according to the fluorescence intensity of the sample.

Dojindo细胞分析

细胞活力和细胞毒性测定用于药物筛选和化学物质的细胞毒性测试。Dojindo开发了高度水溶性的四唑盐,称为WST。WST-8是高度稳定的WST,用于Cell Counting Kit-8(CCK-8)。由于WST-8甲maz是水溶性的,因此不会形成晶体。因此,不需要诸如MTT测定的增溶过程。此外,CCK-8的检测灵敏度高于其他四唑盐,例如MTT,XTT,MTS或WST-1。

WST检测机制

 

ß-半乳糖苷酶检测试剂

细胞增殖/细胞毒性转染细胞染色细胞内荧光探针细菌染色微生物活力测定干细胞分化SPiDER-ßGal线粒体检测细胞代谢

应用 产品展示
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