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Mag-Bind mRNA Enrichment Kit(10)试剂盒说明书

    上海生物供应Mag-Bind mRNA Enrichment Kit（10）试剂盒说明书，上海生物是一家集研发、销售为一体的技术生物企业，公司专注于生命科学和生物技术领域，专业提供分子生物学、免疫学、生命科学基础研究以及临床检测等诸多领域的试剂、耗材、仪器等各类产品及生物技术服务。

    美国Omega生物技术公司是一家专门从事核酸分离纯化试剂盒研发与生产的着名企业，是一家*早以硅胶膜纯化为基础的核酸纯化公司，经过长期的不断奋斗和创新，Omega公司在此基础上已经发展出上百种的核酸纯化试剂盒，包括了质粒提取、DNA/RNA纯化、基因组DNA提取、RNA提取、mRNA纯化。特别是在基因组DNA和RNA提取这两个系统中，Omega根据不同材料的特殊性，发展出了一系列针对性相当强的试剂盒，如真菌，植物，昆虫，软体动物，土壤，粪便等样品的DNA/RNA提取试剂盒，因而大大的方便了广大的科研工作者。

    目前公司已经和Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf、Fluka、Hyclone、Merck、Millipore、Omega、Oxoid、Pall、Peprotech、Pharmacia、Pierce、Roche、Sigma、Serva、TBD、Whatman等着名企业结成紧密的合作伙伴关系，代理其世界的尖端产品，并在全国各地设有分销机构。

    产品名称：Mag-Bind mRNA Enrichment Kit（10）

    品牌：Omega

    供应商：上海

    适用范围：该产品用于科研实验，不得用于科研实验。详情信息以说明书为准。

    磁珠MRNA提取试剂盒：不带总RNA提取试剂

    Mag-Bind mRNA Enrichment Kit（10）试剂盒说明书 主要优点：

    1、更快速：半小时就可以得到高纯度mRNA

    2、特异性：磁珠上的oligo（dT）只特异结合mRNA

    3、无需洗脱：提取产物中的磁珠可以不用洗脱而直接进入下游的实验操作

    4、优化过的组分：整个提取试剂盒的组分优化为三种，使操作更简便

    5、无需DNaseⅠ处理就可保证高纯度

    Omega试剂盒，Mag-Bind mRNA Kit（10） 提取的操作步骤：

    1.1.5ml离心管中加入500ul待提取样品，再加入400ul核酸提取液，震荡10秒；

    2.2.将样品处理管置于恒温装置上60℃保温10分钟；

    3.再将样品处理管置于室温放置10分钟后，转移到磁珠分离器上，静置5分钟；待磁珠吸附于管壁后，吸净管中的气泡和液体，保留磁珠；

    4.向管中加入1ml洗涤液，取下后震荡10秒，再置于磁珠分离器上，静置5分钟；重复步骤3，共用洗涤液漂洗2次，*后尽量吸净液体；

    5.若对后续试验无特殊要求，加入50ulDEPC-treated Water，震荡，使磁珠悬浮即可；

    6.若需要将磁珠洗脱下来，可向管中加入50ul洗脱液（DEPC-treated Water或Long-term RNA Storage Buffer），取下并震荡10秒，再将管置于恒温装置上60℃保温5分钟；

    7.立即将上述样品处理管重新置于磁珠分离装置上，静置3分钟，保持样品处理管于磁珠分离装置上，取出清液（弃磁珠），即为提取的RNA。

    Mag-Bind mRNA Enrichment Kit（10）试剂盒说明书，订购说明：

    1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。

    2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。

    3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日价格为准。

    4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。

    5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、电话等形式通知我们。

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    我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户提供高品质的产品和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、极具竞争力的价格，所有这些都保证了我们向您提供的是*专业*优质的服务！

原创作者：上海生物科技有限公司

mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 10 Purifi

    上海生物供应mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 10 Purifications，上海生物是一家集研发、销售为一体的技术生物企业，公司专注于生命科学和生物技术领域，专业提供分子生物学、免疫学、生命科学基础研究以及临床检测等诸多领域的试剂、耗材、仪器等各类产品及生物技术服务。

    Epicentre生物技术公司是一家核酸样品制备试剂以及酶的供给商，Epicentre位于美国威斯康星州麦迪逊的Epicentre生物技术公司成立于1987年，是分子生物学产品的制造商和销售商，其产品广泛应用于RNA扩增及基因表达分析，基于转座子的遗传分析，核酸纯化，DNA序列分析，PCR及RT-PCR扩增，DNA及RNA修饰酶，基因组克隆，体外转录，以及蛋白质研究和纯化等领域。另外，公司拥有广泛的分子生物学产品生产线，可为客户提供蛋白质定制服务。

    产品名称：mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 10 Purifications

    品牌：Epicentre

    供应商：上海

    储存方式：-20℃保存

    适用范围：该产品用于科研实验，不得用于科研实验。详情信息以说明书为准。

    mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 10 Purifications，订购说明：

    1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。

    2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。

    3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日价格为准。

    4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。

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原创作者：上海生物科技有限公司

mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 24 Purifi

    上海生物供应mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 24 Purifications，上海生物是一家集研发、销售为一体的技术生物企业，公司专注于生命科学和生物技术领域，专业提供分子生物学、免疫学、生命科学基础研究以及临床检测等诸多领域的试剂、耗材、仪器等各类产品及生物技术服务。

    Epicentre生物技术公司是一家核酸样品制备试剂以及酶的供给商，Epicentre位于美国威斯康星州麦迪逊的Epicentre生物技术公司成立于1987年，是分子生物学产品的制造商和销售商，其产品广泛应用于RNA扩增及基因表达分析，基于转座子的遗传分析，核酸纯化，DNA序列分析，PCR及RT-PCR扩增，DNA及RNA修饰酶，基因组克隆，体外转录，以及蛋白质研究和纯化等领域。另外，公司拥有广泛的分子生物学产品生产线，可为客户提供蛋白质定制服务。

    产品名称：mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 24 Purifications

    品牌：Epicentre

    供应商：上海

    储存方式：-20℃保存

    适用范围：该产品用于科研实验，不得用于科研实验。详情信息以说明书为准。

    mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit 24 Purifications，订购说明：

    1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。

    2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。

    3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日价格为准。

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产品名称：mRNA-ONLY™ Eukaryotic mRNA Isolation Kit 10 Purifications

品牌：Epicentre

供应商：上海

储存方式：-20℃保存

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mRNA的分离和纯化 mRNA的提取及纯化(磁珠法和亲和柱层析法)

核细胞的mRAN是单顺反子，其最显著的特征是具有５'端帽子结构和3'端的poly A的结构，此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径，人们利用碱基配对原理，采用寡聚Ｔ结构作为亲和柱材料，当含mRNA的总RNA样品流经寡聚Ｔ柱时，mRAN即被特异性的结合到柱上，从而可与其它RNA相分开，这就是寡聚(dT)纤维素或寡聚(U)琼脂糖亲和柱分离mRAN的原理。目前虽然mRNA的提取已有多种方法，如超速离心法、免疫法，但较常用的、简便的方法还应是柱层析法。不过近几年,mRNA的提取方法又有所改进和突破,mRNA的磁珠分离即是这些新方法中的一类主要技术。该技术建立于３类强有力的相互作用上，即A与T碱基间的强配对性；链菌素抗生物素与生物素间的强免疫作用及稀土元素磁铁与顺磁性物质间的强磁性作用。mRNA的磁珠分离技术提取mRNA的原理主要为用生物素标记的Oligo(dT)与mRNA3'端的poly A退火形成杂交体，然后用带有亲和素(链菌素抗生物素)的顺磁磁珠洗涤并捕获杂交体，形成杂交体－磁珠复合体，最后用磁架将此复合体捕获，这样mRNA即可与其它形式的RNA相分开，进一步用无RNase无菌水洗涤，即可获得纯化的mRNA。

方法一:磁珠法提纯mRNA

一：仪器 水浴离心机 取液器 分光光度计

二：试剂 mRNA 分离系统试剂盒,异丙醇， 3MNaAC

三:磁珠法分离mRNA的原理图示如下：

四：操作

（一 ）生物素标记的Oligo(dT)探针与mRNA的煺火

１：在DEPC处理过的1.5mlEppendof管中，加入0.2-1mg的总RNA和无RNase的水至终体积为0.5ml。

２：65℃加热10min

３：加入2μl生物素标记的Oligo(dT)探针和12μl的20×SSC于RNA中轻轻混匀，室温放置，逐渐冷却平衡至室温，此步操作一般需10min。

（二）亲和素顺磁磁珠（SA-PMPS）的冲洗

4：将SA-PMPS轻晃开后，放入磁性分离架中，使SA-PMPS集中于试管一则(约30秒)， 小心去除上清（不用离心方法）用1.5ml0.5×SSC漂洗SA-PMPS，用磁性分离架集中磁珠，去除上清，漂洗３次。

5：将漂洗过的SA-PMPS重新悬浮于0.2ml0.5×SSC中。

杂交体的生成及漂洗

6：将上步"３"中褪火的生物素标记的Oligo(dT)探针，全部加到上步"5"管中,轻轻混匀，室温放置10min。每隔2分钟轻轻混匀一次

7：用磁性分离架捕获磁珠，吸弃上清。

8：用0.3ml0.1×SSC漂洗SA-PMPS，用磁性分离架集中磁珠，吸弃上清，漂洗4次。

（三）洗涤收集mRNA

9：将漂洗过的SA-PMPS重新悬浮于0.2mlDEPC水中。

10：用磁性分离架捕获磁珠，将洗脱的水相吸至一新管中。重复洗涤一次，吸取水相，两次水相合并(约0.25ml)

11：在洗脱液中加入0.1体积的NaAC,1体积的异丙醇，－２０℃沉淀过夜，12000g 离心10min,75%乙醇洗沉淀，真空干燥。

12：提取mRNA质量的分光光度计检测，将所提mRAN分别在260,280nm比色，要求A：OD260％/ OD280％不小于2.0及40μg所提样品在OD260％的值为1 .

13:提取mRNA质量的电泳检测，在1%的变性胶上，EB染色后，mRNA应在0.5-8Kb间均匀着色，1.5-2Kb间着色较强。

方法二:亲和柱层析法提纯mRNA

该方法利用mRNA上的寡聚A可与较联寡聚T的纤维素柱在高盐下以碱基配对形式发生亲和吸附，而在低盐下，碱基配对能力破坏，吸附解除，而其他成分的RNA则不具该特性，因此在高盐下当RNA抽提样品流经该柱时，mRNA被挂在柱上，而其他RNA则随高盐溶液流出；当用低盐洗脱液洗柱时，mRNA随洗脱液流出。再用有机溶剂沉淀则可得纯化mRNA。

一：仪器，层析系统，其他同方法一

二：试剂，

柱材Oliga(dT）－纤维素

上样液：20mMTris-HCL(pH 7.6)

0.5M NaCL

1mM EDTA (pH 8.0)

0.1% 十二烷基肌氨酸钠（SLS）

洗脱液：10mM Tris-HCL(pH 7.6)

1mM EDTA(pH 8.0)

0.05% SDS

三：操作

1：DEPC处理层析柱

2：0.1M NaOH处理Oliga(dT）－纤维素

3：用1×上样液洗柱至pH< 8.0

4:无菌水溶解RNA，65℃温浴5分钟后，迅速冷却至室温，加等体积2×上样液，上样，分部收集。

5：1倍体积1×上样液洗柱，分部收集。

6：OD260沉淀收集液，确定收集液的该值是否接近0，如该值仍很大，则上样液继续洗柱，直至该值接近0。

7：2－3倍柱床体积的洗脱液，洗柱，分部收集。

8：测定各收集管的OD260，将有吸光值的各管合并。

9：进行方法一的“11－13”步。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,mRNA 脱帽酶,#M0608S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

mRNA 脱帽酶

#M0608S 2,000 U

特性

 mRNA 脱帽酶可使带有 m7G 帽结构的 mRNA 脱帽，产生 5’单磷酸末端。

  ·有效替代烟草酸焦磷酸酶（TAP）

  ·去除 Cap 0 和 Cap 1 的效率相同

  ·适用于 5’RLM-RACE 和 RNA-seq

  ·1 µl 的酶可在 15 min 内将 20 µg 的 mRNA（1.7 kb）完成脱帽

产品信息

 mRNA 脱帽酶可以将 mRNA 5’末端的 7-甲基鸟苷帽（m7G）结构去除，产生 5’单磷酸末端并释放 m7GDP。mRNA 脱帽酶能够使各种长度的 mRNA 脱帽，对 Cap 0 和 Cap 1 的去除效率相同。mRNA 脱帽酶也可将 5’三磷酸末端转化为 5’单磷酸，但转化效率相对较低。5’单磷酸化的 RNA 可用于多种下游应用，包括 5’RNA 连接酶介导的 RACE、RNA-seq 和 5’→3’核酸外切酶消化。

mRNA 脱帽酶（MDE）和烟草酸焦磷酸酶（TAP）脱帽活性的比较

（图 A）用 mRNA 脱帽酶（MDE）或其它品牌的烟草酸焦磷酸酶（TAP）对 500 nM 的 5’加帽 RNA（25 nt）溶液进行脱帽反应。每种酶使用各自适合的反应缓冲液，且反应体积相同。其它品牌的 TAP 浓度未知，经比较显示 0.3 nM 的 MDE 与 1 µl 的 TAP 活性相当。脱帽反应后的反应产物使用毛细管电泳分析。需要注意的是，在阴性对照中，所用的合成底物中都存在 10％的三磷酸 RNA。（图 B）测试了在其它条件不变的情况下，引入不同长度、不同种类末端的 RNA，是否会影响 MDE 的活性，在反应中添加 500 ng Jurkat 细胞总 RNA。结果显示：MDE 的脱帽活性不受影响，而 TAP 活性则显着降低，这说明 MDE 的脱帽能力在该测试条件下更稳定。

随酶提供的试剂

储存温度 (°C)

浓度

mRNA Decapping Enzyme Reaction Buffer


储存温度

-20°C