Hygromycin B 潮霉素B 抗生素

2022年8月5日 作者 jinpanbio
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Hygromycin B 潮霉素B 抗生素:潮霉素B(Hygromycin B),从吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分离到的一种氨基糖苷类抗生素。通过与30S核糖体亚基结合,诱导对mRNA模板的错读且抑制易位,从而以阻止蛋白合成。潮霉素B能杀死细菌、真菌和高等真核细胞。主要用来筛选和维持培养稳定转染Hph载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞)。

 Hygromycin B 潮霉素B

 

产品标签

Hygromycin B潮霉素B;50mg/ml;Hph 潮霉素磷酸转移酶;遗传霉素G418;Blasticidin S 杀稻瘟菌素(灭瘟散);Zeocin博莱霉素;CAS:31282-04-9

 

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)

Hygromycin B 潮霉素B(冻干粉)

MS0003-1G 1g 600

Hygromycin B 潮霉素B(冻干粉)

MS0003-5G 5g 2400

Hygromycin B 潮霉素B(冻干粉)

MS0003-10G 10g 3840

Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B(50 mg/ml)

MS0003-20ML 20ml 820

 

产品描述
潮霉素B(Hygromycin B),从吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分离到的一种氨基糖苷类抗生素。通过与30S核糖体亚基结合,诱导对mRNA模板的错读且抑制易位,从而以阻止蛋白合成。潮霉素B能杀死细菌、真菌和高等真核细胞。主要用来筛选和维持培养稳定转染Hph载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞)。
 

对潮霉素B(Hygromycin B)的抗性来源于大肠杆菌潮霉素抗性基因(hph或hyg),该基因能编码潮霉素磷酸转移酶(hygromycin phosphotransferase),使得潮霉素B发生磷酸化从而失去活性。目前Hph抗性基因主要有两种来源,zui初来源是大肠杆菌(Escherichia coli),另一来源是潮霉素B产生菌吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。如今,携带Hph抗性的载体大多来自大肠杆菌。

我司提供两种产品形式的潮霉素B。
 

一种以冻干粉形式提供,货号分别为:MS0003-1G,MS0003-5G,MS0003-10G。需要配制成储存液后备用。

一种以溶于PBS的无菌液体形式提供,货号为MS0003-20ML,使用更简单方便。
 

 

产品特性
1)   化学名:O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1-2-3)-O-β-D-talopyranosyl(1-5)- 2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine
2)   同义名:Hygromycin B, from Streptomyces hygroscopicus 潮霉素质B,来源于吸水链霉菌

3)   CAS NO:31282-04-9

4)   分子式:C20H37N3O13

5)   分子量:527.53 g/mol

6)   外观:类白色至白色粉末

7)   纯度:≥90%(HPLC)

8)   效价:≥1050 U/mg

9)化学结构:

 

保存与运输方法

保存:粉末-20℃干燥保存,2年有效。溶液2-8°C避光保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法
1、   储存液制备

1)潮霉素B(粉末形式):称取适量粉末溶于1×PBS配制成50mg/ml溶液,用0.22μm滤膜过滤除菌,置于2-8°C避光保存。

2)潮霉素B(溶液形式):已是无菌储存液,直接用细胞培养液稀释到工作浓度即可使用。

2、   建议工作浓度

潮霉素B用来筛选稳定转染细胞株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化。1) 哺乳动物细胞 使用浓度为50-1000 μg/ml,常用筛选浓度为200 μg/ml,zuijia浓度需要杀灭曲线来确定2) 植物细胞 常用浓度:20-200 μg/ml;
3)   细菌常用浓度:20-200 μg/ml;
4)   真菌 常用浓度:200-1000 μg/ml;
 

3杀灭曲线的建立

建议初次实验一定要建立杀灭曲线(kill curve),至少设立5个浓度,筛选到适合自身实验体系的zuijia浓度。
1)   将未转化细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃培养过夜;注意:对于需要更高密度以保证活力的细胞,增加接种量。
 

2)   第二日,用含梯度浓度潮霉素B的培养基替换旧培养基。比如,哺乳动物细胞常用浓度为50-1000μg/ml,可设50, 100, 250, 500, 750, 1000μg/m这6个浓度,各3个平行。同时设置一阴性对照,3个平行。
3)   接下来每3-4日更换新鲜的含抗生素培养基。
4)   按照固定周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转化细胞生长的恰当浓度。选择在理想天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选所需的工作浓度。
 

4稳转细胞的筛选
1)   转染48h后,用含zuijia筛选浓度潮霉素B的培养基进行细胞传代。注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果。当细胞密度过高,筛选效率会降低。为了得到较好的筛选效果,建议将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)   每3-4日更换新鲜的含抗生素培养基。
3)   筛选7天后观察并评估细胞集落的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这些取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4)   挑取5-10个抗性克隆到35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)   之后换用正常培养基培养即可。
 

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
 

 

 — — Written/Edited by V. Shallan版权归MKBio所有

 

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 Hygromycin B 潮霉素B 抗生素

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