StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)
StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)
产品简述：
StarLighter Probe qPCR Mix (Universal) 是一款基于探针法对各种来源的DNA样本进行快速定量、实时分析的通用试剂盒。性能优异的热启动基因工程改造Taq DNA polymerase，配合基于探针法qPCR优化的缓冲液，可以有效抑制非特异性扩增，大大增加qPCR扩增效率，适用于进行高灵敏度的qPCR反应。参比染料ROX随试剂盒提供。
本产品使用前只需要加入引物、模板、探针、ROX（根据使用的机型而定）和水。定量范围宽，可以对靶基因进行准确的定量、定性和SNP检测；本产品具有重复性好，可信度高，并兼容各种不同类型的qPCR探针的特点。
产品优势:
l 扩增特异性强，数据结果可靠；
l 高GC模板扩增能力强；
l 扩增效率高，Ct值提前 ；
l 信噪比高，低copy检测灵敏度高。
产品应用：
l 基因表达分析；
l SNP和等位基因分型；
l 测序和微阵列结果的验证。
产品性能比较：
利用ARMS-qPCR技术对ApoE两个基因亚型ApoE2、ApoE3进行分型：以携带ApoE3基因亚型的人类基因组为模板，设计两对亚型特异性引物（对应亚型可以扩增，非对应亚型不能扩增。与某竞品平行测试。
ACTB：内参基因；ApoE: 待测基因（片段长度197bp，GC含量71%）
1、扩增特异性强，数据结果可靠
Fig1：使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)试剂，利用携带ApoE3基因亚型的人类基因组为模板，AopE2没有扩增，AopE3扩增良好，说明StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)目的产物扩增特异性好; 竞品未能扩增出高GC片段。
2. 高GC模板扩增能力强
Table1：使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)试剂，利用携带ApoE3基因亚型的人类基因组为模板，和竞品ct值比较
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模板 5ng |
Ct值ApoE2 |
Ct值ApoE3 |
|
StarLighter Probe qPCR Mix(Universal) |
>45 |
28.08 |
|
竞品 |
>45 |
>45 |
Fig2：以人基因组为模板，模板浓度分别为50ng、5ng、0.5ng、0.05ng，扩增ApoE3基因，扩增片段长度197bp，GC含量71%。使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)试剂可得到有效扩增，而竞品没有扩增出ApoE3（Ct>45）。
3. 普通GC含量模板扩增效率高，梯度稀释线型范围好
a、StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)与竞品扩增内参基因ACTB比较
Fig3：以人基因组为模板，模板浓度分别为50ng、 5ng、0.5ng、0.05ng，扩增内参基因ACTB基因，扩增片段长度179bp，使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)可有效扩增ACTB基因，扩增效率和R2值均优于竞品。CT值比竞品提前约1-1.5个cycle。
4、低拷贝模板检测灵敏度高
Fig4：以人类基因组为模板，模板起始浓度为100ng，将模板进行5倍梯度稀释，使用StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)试剂。当模板浓度低至0.032ng时，内参基因ACTB和目的基因ApoE3仍能得到有效扩增，且起始模板量的log值和其Ct值线性关系良好。
5、高稳定性
Fig5：不同冻融次数对StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)试剂的稳定性影响，加入不同起始量模板情况下，不同冻融次数的扩增曲线重复性良好。
Fig6 : 37℃处理5天对StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)试剂的稳定性影响。加入不同起始量模板情况下，37℃储存5天试剂的扩增曲线与未经37℃处理的试剂的扩增曲线重复性良好。
Fig7 : 室温处理28天对StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)试剂的稳定性影响。加入不同起始量模板情况下，室温处理28天试剂的扩增曲线与未经室温处理的试剂的扩增曲线重复性良好。（本实验在Q6上完成）
Fig8 : 4℃处理43天对StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)试剂的稳定性影响。加入不同起始量模板情况下，4℃处理43天试剂的扩增曲线与未经 4℃处理的试剂的扩增曲线重复性良好。（本实验在Q6上完成）
产品在人类基因分型中的应用实例：
实例一
以已知分型的不同个体人类血液提取的基因组为模板，设计ApoE基因亚型特异性引物，使用StarLighterProbe qPCR Mix(Universal)，通过qPCR扩增对不同个体携带的ApoE基因进行分型，得到的分型结果与已知分型情况一致。
Table2：不同个体人类基因组ApoE分型
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StarLighterProbe qPCR Mix(Universal)分型 |
已知分型 |
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样本编号 |
基因型 |
rs429358 |
rs7412 |
rs429358 |
rs7412 |
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201907000001 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
|
201907000002 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
|
201907000003 |
e2/e3 |
TT |
CT |
TT |
CT |
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201907000004 |
e2/e3 |
TT |
CT |
TT |
CT |
|
201907000005 |
e2/e4 |
TC |
CT |
TC |
CT |
|
201907000006 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
|
201907000007 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
|
201907000008 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
|
201907000009 |
e3/e4 |
TC |
CC |
TC |
CC |
|
201907000010 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
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201907000011 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
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201907000012 |
e3/e3 |
TT |
CC |
TT |
CC |
实例二
G719S(18外显子)、T790M（外显子）是位于表皮生长因子受体(EGFR)基因不同外显子上的突变点，这些突变与肺癌，宫颈癌等癌症的靶向用药有关。G719S(18外显子)、T790M（外显子）两个突变的筛查可用于指导不同靶向药物的使用。
通过将待检测突变位点设计在探针中间，以人类基因组为模板，通过qPCR基因分型结果可以判断是否携带该突变。
Fig9：使用StarLighter Probe qPCR Mix（Universal）和竞品进行基因分型，结果一致
说明书附件下载：
StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)说明书V1.pdf