细胞增殖-毒性检测–CCK-8试剂盒,同仁Dojindo CK04

2022年5月12日 作者 jinpanbio

cell counting kit-8 简称cck-8试剂盒,为mtt法的替代方法,是一种基于wst(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2h-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验
使用说明:
一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。
3、接种后培养至细胞贴壁,然后加cck-8试剂培养一定时间后测定od 值,制作出一条以细胞数量为横坐标(x 轴),od 值为纵坐标(y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入cck-8后的培养时间。)
二、细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液(100μl/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% co2的条件下)。
2、向每孔加入10μl cck-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响od值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定od值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μl 0.1m的hcl或者1%sds(w/v)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测
1、在96孔板中配置100 μl 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37 ℃,5% co2的条件下)。
2、向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
3、向每孔加入10 μl cck-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响od值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加cck-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。
4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
6、如果暂时不测定od 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μl 0.1m的hcl或者1%sds(w/v)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算:.
细胞活力(%)=[a(加药)-a(空白)]/[ a(0加药)-a(空白)]×100
a(加药):具有细胞、cck-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
a(空白):具有培养基和cck-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
a(0 加药):具有细胞、cck-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
注意事项:
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入cck-8试剂后的培养时间。
②白细胞可能需要培养较长时间。
③当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1 ,000个/孔 (100 μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 ( 100 μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10% 加入cck-8溶液。
④如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm检测灵敏度最高。
⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

【100T】Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

CK12-100T

操作简便,通过2种方法检测细胞毒性的LDH检测试剂盒。换液不换液都可使用。

CCK-8反应终止液

Stop Solution for CCK-8

货号:CK13

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒

货号:CK18-200tests*3

ATP是生物体内最直接的能量来源,在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用,甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸(ATP)的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板,10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外,本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。