Dojindo,SulfoBiotics – 生物素-HPDP(WS) 溶液/500/SB17

2022年5月1日 作者 jinpanbio
Product Description
Biotin-HPDP(WS) 是一种新型水溶性生物素标记试剂,由 Biotin-HPDP(产品代码:B573)改性而成。 Biotin-HPDP 是一种通过可逆二硫键将生物素部分引入蛋白质巯基的常规试剂。 该试剂可用于通过使用亲和素包被的珠子对生物素化蛋白质进行亲和纯化,因为二硫键可被还原剂裂解(图 1)。 因此,生物素-HPDP 已广泛用于生物素开关测定,这是一种用于蛋白质硫醇修饰(如 s-亚硝基化、s-硫化和 s-棕榈酰化)的分析技术。 然而,由于在水中的低溶解度,甚至在 DMSO 和 DMF 中,溶液的制备非常耗时。 因此,开发了Biotin-HPDP(WS)溶液以提高Biotin-HPDP的溶解度。-SulfoBiotics-Biotin-HPDP(WS)溶液是一种易于使用的水溶液,含有20mmol/l Biotin-HPDP(WS)。

Figure 1 Schematic Protocol for Biotin Labeling with Biotin-HPDP(WS) and Purifiation of the Biotinylated Protein

GAPDH 的生物素标记和抗生物素蛋白珠的回收 -< 程序 >1。将溶解缓冲液(35 μl)和溶解缓冲液(5μl)中的 100 mmol/l DTT 加入到 1.5 ml 微管中的 10 μl 1 mg/ml GAPDH 的 PBS 溶液中,并涡旋混合。 2. 37℃孵育30分钟后,将溶液全部转移至10K过滤管中,12000转离心10分钟。 3.向过滤管中加入PBS(50 μl),12,000 rpm离心10分钟。 4.重复第 3 步。 5.将RIPA缓冲液(126 μl)和4 mmol/l Biotin-HPDP(WS)的H2O溶液(14 μl)加入过滤管中,通过移液管与蛋白质混合。 6.滤管37℃保温1小时,12000转/分离心10分钟。 7.向试管中加入 PBS(50 μl),并以 12,000 rpm 的转速离心 10 分钟。 8.重复步骤7。 9.向管中加入中和缓冲液(400 μl),通过移液管溶解生物素标记的蛋白质,并将溶液转移至1.5 ml-microtube。 10.将步骤 9 的溶液 (50 μl) 添加到试管中的 NeutravidinTM 琼脂糖珠中。 ※ Neutravidin琼脂糖珠在反应前用中和缓冲液洗涤。 11.将溶液在4℃温育1小时。12.将试管以 2,500 rpm 的速度离心 1 分钟,然后使用移液管去除上清液。13。向试管中加入中和缓冲液(+600 mmol/l NaCl)(1 ml)并以 2,500 rpm 的速度离心 1 分钟,然后使用移液器除去上清液。 14.步骤 13 重复两次。 15.将中和缓冲液 (1 ml) 添加到试管中并以 2,500 rpm 离心 1 分钟,然后使用移液器除去上清液。16。重复第 15 步。 17.向试管中加入洗脱缓冲液 (50 μl),涡旋混合。将溶液在4℃温育1小时。18.将试管以 2,500 rpm 离心 1 分钟,将 10 μl 上清液转移到 1.5 ml 微管中。19。将加载缓冲液 (2 μl) 添加到微管中,并将溶液应用于 SDS-PAGE(CBB 染色)和蛋白质印迹。

Figure 2 Detection of recovered GAPDHComparison between Biotin-HPDP and Biotin-HPDP (WS)

1. S. R. Jaffrey and Solomon H. Snyder, “The Biotin Switch Method for the Detection of S-Nitrosylated Proteins “, Sci. STKE, 2001, 86, pl1.2. X. Wang, N. Kettenhofen, S. Shiva, N. Hogg, and M. Gladwin, “Copper dependence of the biotin switch assay : modified assay for measuring cellular and blood nitrosated proteins”, Free Radic. Biol. Med., 2008, 44, 1362.3. M. T. Forrester, M. W. Foster, M. Benhar, and J. S. Stamler, “Detection of Protein S-Nitrosylation with the Biotin Switch Technique”, Free Radic. Biol. Med., 2009, 46(2), 119.4. M. D. Kornberg, N. Sen, M. R. Hara, K. R. Juluri, J. V. K. Nguyen, A. M. Snowman, L. Law, L. D. Hester, and S. H. Snyder, “GAPDH Mediates Nitrosylation of Nuclear Proteins”, Nat. Cell Biol., 2010, 12(11), 1094.5. J. Wan, A. F. Roth, A. O. Bailey, and N. G. Davis, “Palmitoylated proteins: purifi cation and identification”, Nat. Protoc., 2007, 1573. 6) A. K. Mustafa, M. M. Gadalla, N. Sen, S. Kim, W. Mu, S. K. Gazi, R.K. Barrow, G. Yang, R. Wang, and S. H. Snyder, “H2S Signals Through Protein S-Sulfhydration”, Sci. Signal., 2009, 2(96), ra72.

Dojindo细胞分析

细胞活力和细胞毒性测定用于药物筛选和化学物质的细胞毒性测试。Dojindo开发了高度水溶性的四唑盐,称为WST。WST-8是高度稳定的WST,用于Cell Counting Kit-8(CCK-8)。由于WST-8甲maz是水溶性的,因此不会形成晶体。因此,不需要诸如MTT测定的增溶过程。此外,CCK-8的检测灵敏度高于其他四唑盐,例如MTT,XTT,MTS或WST-1。

WST检测机制

 

ß-半乳糖苷酶检测试剂

细胞增殖/细胞毒性转染细胞染色细胞内荧光探针细菌染色微生物活力测定干细胞分化SPiDER-ßGal线粒体检测细胞代谢

应用 产品展示
细胞生长检测,药物筛选,比色/荧光检测 细胞计数试剂盒-8
细胞计数试剂盒8 + 96孔有机硅定向剂
细胞计数试剂盒-F
细胞毒性LDH检测试剂盒
-WST 96孔有机硅定向剂
MTT
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细胞周期分析 细胞周期测定溶液深红色
细胞周期测定溶液蓝色