Dojindo,Bacstain-CTC快速染色试剂盒-用于流式细胞术/100/BS01

Product Description

使用琼脂板形成菌落是一种非常常见且可靠的细菌细胞计数方法。然而，形成一个殖民地需要相当长的时间。因此，已经开发了替代的检测方法。细菌特异性基因扩增方法，如 PCR、LAMP 和细胞核染色非常快速，但这些方法也可以计算死细菌。因此，检测活细胞功能对于确定样本中活细菌的实际数量至关重要。四唑鎓盐可用于检测细菌细胞或线粒体的呼吸活动。 CTC 是一种四唑盐，通过这种呼吸活动被还原，在细胞表面形成荧光 CTC 甲臜。因此，CTC 用于需氧活菌的特异性染色，可应用于难以培养的细菌（VNC：活但不可培养）。 CTC 通过电子转移系统形成荧光甲臜。然而，单独的 CTC 不足以对单个细胞进行染色。因此，CTC-Rapid Staining Kit 含有一种增强试剂，可提高 CTC 染色效率。与仅使用 CTC 染色相比，该染色试剂盒能够快速、灵敏地对微生物进行染色。 CTC 甲臜染料的最大激发波长为 430 nm 或 480 nm，发射波长为 630 nm。

General Staining Protocol

显微镜检测1。 离心细菌培养物并去除上清液，然后用PBS(-)重悬细菌沉淀。2． 添加 CTC + 增强试剂-B。 在 37°C 下孵育 1 小时。 3. 准备一张幻灯片并通过 B 激发滤光片组检测荧光。

流式细胞仪检测1。 离心细菌培养物并去除上清液，然后用PBS(-)重悬细菌沉淀。2． 添加 CTC + 增强试剂-A。 在 37°C 下孵育 1 小时。 3. 用流式细胞仪分析细胞：488 nm 激发，630 nm 发射。

1. A. Hiraishi, et al., An Improved Redox Dye-Staining Method Using 5-Cyano-2,3-Ditoryl Tetrazolium Chloride for Detection of Metabolically Active Bacteria in Activated Sludge. Microbes Environ. 2004;19:61-70.2. A. Kitaguchi, et al., Enumeration of Respiring Pseudomonas spp. in Milk within 6 Hours by Fluorescence In Situ Hybridization Following Formazan Reduction. Appl Environ Microbiol. 2005;71:2748-2752.

FACS DataE. coli

B. Subtilis

Candida albicans

E. faecalisFig. 2 CTC staining of various microorganisms with and without Enhancing reagent.

Experimental ExampleObservation by Microscopy

Fig. 3 E. coli staining (left) and L. casei staining (right) with CTC and DAPI. Bacterial cells were stained with CTC Rapid Staining Kit first, and then 1 μl of DAPI solution was added. The cells were incubated at room temperature for 5 min. Formaldehyde fixation with 1-4% formaldehyde can be performed before DAPI staining.