快速FITC 抗体(蛋白)标记试剂盒 (Quick FITC Antibody(protein) Labeling Kit)包含蛋白质标记染料和去除多余染料所需的全部组分。异硫氰酸荧光素(FITC)可以与蛋白质上的氨基,巯基,咪唑基,酪氨酰基和羰基发生交联反应。然而,只有伯胺和仲胺的衍生物才能产生稳定的标记产物。反应在pH 8-9下效率最高,并且必须在无胺缓冲液如硼酸盐或碳酸盐/碳酸氢盐中进行。通常,蛋白质与15至20倍摩尔数的FITC反应,可导致几个FITC分子与一个蛋白质分子结合。装填有纯化树脂的离心柱简化了柱平衡、收集和监测重力流分的步骤。该系统能够有效去除多余的FITC,从而准确测定染料与蛋白的比例(F/P)和蛋白浓度。
本试剂盒可用于标记和纯化3次 1 mg (2mg/mL)或者6次0.5mg (2mg/mL)的IgG或其他蛋白质。
试剂盒特点:
•操作简单,可在约一小时完成蛋白标记和纯化
•优化的F/P值
•无需称量微量粉末; 试剂盒包含一次性试剂瓶
•高效的纯化试剂盒包括纯化树脂和离心柱,确保快速有效地去除未反应的染料并拥有优异的蛋白质回收率
应用:
标记抗体或者含有伯氨的蛋白质、多肽
产品内容
| 产品组成 |
3T |
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FITC(异硫氰酸荧光素) |
1mg*3 |
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标记缓冲液 |
5ml |
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离心型纯化柱 |
6套 |
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2ml 离心管 |
6个 |
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纯化凝胶(50%) |
12ml |
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说明书 |
1份 |
保存条件
FITC需要-20℃避光保存; 其他组分4℃保存。
FITC相关参数
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激发/发射(nm): |
494⁄518 |
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染料: |
Fluorescein (FITC) |
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标记规格 |
0.5-1 mg |
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标记目标: |
蛋白质(抗体) |
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产品规格: |
3 T |
实验数据展示
1. FITC标记结果与进口品牌对比
图1. 与进口品牌FITC 标记抗体流程及结果对比。标记的FITC-IgG的F/P=2.4,好于进口品牌(0.189),并且在规定范围内,而且蛋白收率与进口品牌相当。
2. 用于流式检测
图2. 本组数据分别采用商业化荧光二抗、进口品牌和荧光标记试剂盒制作的FITC-IgG(羊抗鼠),用于免疫荧光流式检测Hela细胞GAPDH。由图可知,与进口品牌试剂盒相比,FITC-IgG二抗背景荧光几乎相同,都在正常范围以内,但实验组的检测效果更好,而且所用抗体量也最少。相同实验处理条件下,的检出阳性率可达93.64%,与商业化荧光二抗检测出的阳性率相近(96.53%),说明荧光标记试剂盒纯化得到的荧光二抗可以媲美商业化抗体,可以用于标记实验。
3. 用于细胞爬片免疫荧光镜检
图3. A549-GAPDH细胞爬片免疫荧光镜检。 采用试剂盒标记的进行标记的FITC-IgG(goat anti-rabbit)荧光二抗,荧光显微镜40倍物镜拍摄,绿色荧光表示荧光标记的GAPDH,蓝色荧光代表细胞核。
4.FITC-标记BSA 独立重复实验测试
图4. FITC标记BSA独立重复实验。FITC-BSA测得的参数进行对比,可以看出重复性非常好,F/P值以及蛋白浓度近乎一致。
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