考马斯亮蓝G250

考马斯亮蓝G250；Brilliant Blue G
分子式：C47H48N3NaO7S2   分子量：854.02
简介：考马斯亮蓝G250（Coomassie brilliant blue G250），考马斯亮蓝G-250在流离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。是常用蛋白染色剂，可用于染色丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的蛋白质。考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
别名：考马斯亮蓝G250 ;考马斯亮兰G250，酸性蓝90，考马斯亮蓝G，亮蓝G ;Acid Blue 90 Brilliant Blue G 250 C.I. 42655 Coomassie® Brilliant Blue Gand G 250 Coomassie Blue G250
物理性状及指标：
外观：……………………暗蓝-紫-棕色固体
熔点：……………………>100℃
溶解性：…………………Water：40mg/ml；Ethanol：40mg/ml；DMSO：10mg/ml；DMF：0.5 mg/ml
最大吸收波长：…………610nm
储存条件：常温，避光防潮密闭干燥

运输条件：常温运输
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用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。本品为是分析生化中SDS-PAGE和BN-PAGE中蛋白质染色剂，也是P2X7嘌呤能受体激动剂。
使用方法推荐
考马斯亮蓝G-250配制
1.称取100mg考马斯亮蓝G-250。
2.溶于50ml90%乙醇中。
3.加入85%的磷酸10ml。
4.最后用蒸馏水定溶到1000ml。
（此溶液在常温下可放置一个月。）
具体操作步骤：
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug-150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30rain。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
【注意】：考马斯亮蓝染色法的缺点：
(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
(2)该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。还有一些物质干扰此法的测定，如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
【注意】
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