Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖/毒性检测试剂,日本DOJINDO同仁化学产品
2022年5月12日Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖／毒性检测试剂
Cell Counting Kit-8是用于化学药物等对细胞增殖或毒性实验时进行细胞计数的试剂盒。试剂盒中使用高灵敏度的新型水溶性四唑盐WST-8甲臜染料作为显色底物，与传统的细胞计数试剂盒相比，灵敏度大幅度的提高。WST-8被细胞内的脱氢酶还原产生水溶性的甲臜染料。通过直接测量甲臜染料（450 nm）的吸光度，即可测出活细胞的数量。细胞数量与甲臜染料成正比关系。同时试剂盒为配置好的1瓶溶液，易于使用。
CCK-8使用例
CCK-8与LDH
Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST同时检测细胞毒性
细胞: HeLa
培养基: MEM, 10% FBS
孵育条件: 37℃, 5% CO2, 48小时
检测波长: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® (490 nm)
使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标，Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标，实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用，能更全面的表征细胞毒性。
《cck-8法与mtt法相比的显著特点》
★ 灵敏度高，数据可靠，重现性好
★ 操作简便，省时省力
★ 水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞
★ 无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低
★ 为1瓶溶液，毋需预制，即开即用
★ 适合于高通量药物筛选
《cck-8用途》
药物筛选、细胞增殖检测、细胞毒性检测、肿瘤药敏试验
《cck-8毒性》
cck-8和其他检测方法对比可以得出cck-8对细胞几乎无毒性，不伤害细胞，细胞可重复利用。
《原理图》
cell counting kit-8(cck-8)利用了同仁化学研究所(dojindo)开发的四唑盐——wst-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2h-四唑单钠盐)，它在电子载体1-methoxy pms存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料。cck-8溶液可以直接加入到细胞样品中；不需要预配各种成分。cck-8法是用于测定细胞增殖或细胞毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。cck-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。wst-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如mtt, xtt, mts或wst-1高。由于cck-8溶液相当稳定，并且对细胞没有毒性，因此可以长时间孵育。
《cck-8 检测步骤》
1：向各孔中加入100 μl细胞悬液a)。
2：在37℃下预孵育培养板b)。
3：向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。
4：37℃下孵育。
5：向各孔中加入10 μl的cck-8溶液d)。
6：37℃下孵育1-4小时e)。
7：测定450 nm处的od值。
a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。
b) 建议使用co2培养箱过夜预培养。
c) 使用培养基或pbs来制备溶液。
d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有cck-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。
如果该吸光度很小，则可以直接加入cck-8，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，
并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl cck-8进行检测。
e) 白细胞可能需要培养较长时间。