NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,dam–/dcm– E. coli 感受态细胞#C2925H

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

dam–/dcm– E. coli 感受态细胞

#C2925H 20 x 0.05 ml

#C2925I 6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 适用于培养无 Dam 和 Dcm 甲基化的质粒

 无动物来源产品

概述

甲基转移酶缺失的 E. coli 感受态细胞，适用于无 Dam 和 Dcm 甲基化质粒的生长。

基因型

ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22 mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) Tet ^S endA1 rspL136 (Str ^R) dam13::Tn9 (Cam^R) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

特性

• 适用于无 Dam 和 Dcm 甲基化质粒的培养

• 缺失非特异性核酸内切酶 I（endA1）活性，可用于制备高质量质粒

转化效率

1–3 x 10⁶cfu/µg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA31）、氯霉素、呋喃妥因、链霉素

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB Turbo E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB Turbo E. coli 感受态细胞（高效级）

#C2984H 20 x 0.05 ml

#C2984I 6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 100 ml

优点

 严谨的表达调控（lacI^q）

 6.5 小时后即可见到菌落

 生长 4 小时后即可提取 DNA

 质粒携带氨苄抗性，5 分钟完成转化实验

 克隆毒性基因

 无动物来源产品

概述

该 E. coli 感受态细胞适用于高效级转化，且菌落生长迅速（6.5 小时）。

基因型

F´ proA⁺B⁺ lacI^q ΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lacproAB) glnV galK16 galE15 R(zgb-210::Tn10)Tet^S endA1 thi-1 Δ(hsdS-mcrB)5

特性

• 可做蓝/白斑筛选

• 缺失非特异性核酸内切酶 I（endA1）活性，可用于制备高质量质粒

转化效率

高效级：1–3 x 10⁹ cfu/μg pUC19 DNA

电转级：> 1 x 10¹⁰ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2），呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB Turbo 转化实验：使用 NEB Turbo 产品，8 小时后即可见到菌落。连接产物转化至 50 μl NEB Turbo E.coli 感受态细胞中，涂布于 LB/Amp 平板，37℃ 下分别孵育 8 小时、10 小时和 12 小时。NEB Turbo 可加快菌落的生长速度和蓝/白斑的筛选，从而使克隆实验变得更简便。

过夜培养的单菌落，液体培养 3 小时后即可用于小量制备 DNA。再培养 1 小时后 DNA 产量加倍。

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB Turbo E. coli 电转级感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB Turbo E. coli 电转级感受态细胞

#C2986K 6 x 0.1 ml

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（高效级）

#C2987H20 x 0.05 ml

#C2987I6 x 0.2 ml

#C2987P1 x 96 孔板

#C2987R1 x 384 孔板

#C2987U96 x 50 μl/管

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 DH5α 衍生物

 无动物来源产品

概述

NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞为 DH5α 衍生物，为多功能克隆菌株

基因型

fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 f80Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 relA1 endA1 thi-1 hsdR17

特性

• 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的（hsdR）非甲基化 DNA

• 可进行蓝/白斑筛选

• 缺失非特异性核酸内切酶 I（endA1）活性，可用于制备高质量质粒

• 可减少克隆 DNA 的重组反应（recA1）

转化效率

高效级： 1–3 x 10⁹cfu/μg pUC19 DNA

亚克隆效级： > 1 x 10⁶ cfu/μg pUC19 DNA

电转级： > 1 x 10¹⁰ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 5-alpha E. coli感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级

#C2988J 6 x 0.4 ml

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 5-alpha E. coli 电转级感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 5-alpha E. coli 电转级感受态细胞

#C2989K 6 x 0.1 ml

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞（高效级）

#C2992H 20 x 0.05 ml

#C2992I 6 x 0.2 ml

NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞（高效级）

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 严谨的表达调控（lacI ^q）

 克隆毒性基因

 含 F´ 因子的菌株，具有极高的转化效率

 DH5α 衍生物

 无动物来源产品

概述

该菌株含 F´因子，转化效率极高，适于克隆毒性基因。

基因型

F´proA+B+ lacI^q Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (Tet^R) / fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 f80 Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 endA1 thi-1 hsdR17

特性

• 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的（hsdR）非甲基化 DNA

• 可进行蓝/白斑筛选

• 缺失非特异性核酸内切酶 I（endA1）活性，可用于制备高质量质粒

• 可减少克隆 DNA 的重组反应（recA1）

• 适用于 M13 噬菌体克隆的繁殖

转化效率

高效级： 1–3 x 10⁹ cfu/μg

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、四环素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 10-beta E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 10-beta E. coli 感受态细胞（高效级） #C3019H20 x 0.05 ml

#C3019I6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 100 ml

优点

 可克隆大质粒和 BACs

 DH10B 衍生物

 无动物来源产品

概述

该 E. coli 感受态细胞为 DH10B 衍生物，广泛应用于多种高效级转化，包括克隆大质粒与BAC。

基因型

Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15 e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG

rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsd^RMS-mcrBC)

特性

• 可高效转化真核来源的甲基化 DNA 或来自 PCR、cDNA 或其它来源的未甲基化 DNA

• 无需 IPTG，可进行蓝/白斑筛选

• 缺失非特异性核酸内切酶 I（endA1）活性，可用于制备高质量质粒

• 可减少克隆 DNA 的重组反应（recA1）

转化效率

高效级：1–3 x 10⁹cfu/μg pUC19 DNA

电转级：> 2 x 10¹⁰ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、链霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

质粒大小对转化效率的影响：化学法制备的 NEB 10-beta 感受态细胞比 NEB 5-alpha 更适合于大质粒的转化。如上图所示，质粒越大，两种感受态细胞转化效率的差值就越大。

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB 10-beta E. coli 电转级感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB 10-beta E. coli 电转级感受态细胞

#C3020K 6 x 0.1 ml

NEB代理,感受态细胞,克隆菌株,NEB E. coli 稳定感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 克隆菌株

NEB E. coli 稳定感受态细胞（高效级）

#C3040H20 x 0.05 ml

#C3040I6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 抗噬菌体 T1 感染（fhuA）

 无动物来源产品

概述

化学感受态 E. coli 细胞适用于高效转化及含重复片段的质粒提取。

基因型

F´ proA+B+ lacI^q Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (Tet^R)/Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15

e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (Str^R) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

特性

• endA 突变，可用于制备高质量质粒

• 生长迅速的 recA 菌株

应用

• 不稳定插入片段的克隆

• 慢病毒及逆转录病毒克隆的分离及扩增

• 与 Gibson 组装反应及连接反应兼容

转化效率

1–5 x 10⁸ cfu/μg pUC19 DNA (NEB #C3040H)

> 1 x 10⁹cfu/μg pUC19 DNA (NEB #C3040I)

抗性

T1 噬菌体（fhuA）、链霉素、四环素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,NEB 表达 E. coli 感受态细胞高效级#C2523H

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

NEB 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C2523H 20 x 0.05 ml

#C2523I 6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . . . ¥939

优点

 BL21 源增强型菌株，最适于启动子为 P_lac、P_tac、P_trc的表达载体

 菌落快速培养

 无动物来源产品

 蛋白酶缺陷型菌株

概述

全能型无 T7 表达菌株，为 pMAL 蛋白融合表达与纯化系统的推荐宿主菌株。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr- 73::miniTn10–Tet^S)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–Tet^S)

endA/Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

• 不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率

高效级：0.6–1 x 10⁹cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素、壮观霉素、链霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,BL21 (DE3) E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

BL21 (DE3) E. coli 感受态细胞

#C2527H20 x 0.05 ml

#C2527I6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 常规 T7 表达

 无动物来源产品

 蛋白酶缺陷型 B 菌株

概述

广泛应用的 T7 表达 E. coli 菌株。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ΔhsdS λ DE3 = λ sBamHIo ΔEcoRI-B int::

(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 Δnin5

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

• 抗 T1 噬菌体感染（fhuA2）

转化效率

1–5 x 10⁷cfu/µg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,Lemo21(DE3) E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

Lemo21(DE3) E. coli 感受态细胞 #C2528J 12 x 0.05 ml

优点

 表达问题蛋白

 表达膜蛋白

 细胞周质表达的理想选择

 表达毒性蛋白

 表达存在可溶性问题的蛋白

概述

Lemo21（DE3）E. coli 感受态细胞为 T7 可控表达菌株，专为表达具有挑战性的重组蛋白而设计。它作为 BL21（DE3）的衍生菌株，不仅继承了其特点，还能够通过改变 T7 溶菌酶（lysY）的水平以控制表达水平，T7 溶菌酶为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制剂。对蛋白表达的精准控制使得 Lemo21（DE3）成为表达膜蛋白、毒性蛋白、分泌蛋白以及存在可溶性问题蛋白的理想选择。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm]ΔhsdS/ pLemo(CamR) λ DE3 = λ sBamHIo ΔEcoRI-Bint::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 Δnin 5pLemo = pACYC184-PrhaBAD-lysY

特性

• BL21（DE3）源增强型菌株

• 精准的表达调控

• 在 T7 菌株中表达范围最宽（0-2,000 μM 鼠李糖）

• 消除了形成包涵体的潜在可能

转化效率

高效级：1–3 x 10⁷ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2），氯霉素

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

L-鼠李糖溶液

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,NiCo21(DE3) E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

NiCo21(DE3) E. coli 感受态细胞 #C2529H20 x 0.05 ml

优点

 常规表达时 BL21（DE3）的卓越替代品

 通过 IMAC 分离的目的蛋白纯度更佳

 无动物来源产品

概述

利用固相金属离子亲和层析（IMAC）分离含多聚赖氨酸标签的重组蛋白时，目的蛋白经常被大量的 E. coli 内源金属结合蛋白所污染。蛋白表达菌 NiCo21（DE3）通过改造，使 IMAC 组分中的 E. coli 蛋白污染减少到最低：GlmS 在突变后消除了与 IMAC 树脂结合的能力，另外 3 种蛋白（SlyD、ArnA 与 Can）在加上重组标签后，能够通过几丁质亲和层析快速去除。

基因型

can::CBD fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3)[dcm] arnA::CBD slyD::CBD glmS6Ala ΔhsdS λ DE3= λ sBamHIo ΔEcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1)i21 Δnin5

特性

• 与 BL21（DE3）的生长特点一致

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

转化效率

1–5 x 10⁷cfu/µg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,BL21 E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

BL21 E. coli 感受态细胞

#C2530H 20 x 0.05 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 P_lac, P_tac, P_trc, ParaBAD 等表达载体的理想选择

 抗噬菌体 T1 感染（fhuA2）

 蛋白酶缺陷型

 无动物来源产品

概述

为广泛使用的无 T7 E. coli 表达菌株，适用于高效转化与蛋白表达实验，此菌株不表达 T7 RNA 聚合酶。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal [dcm] ΔhsdS

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

转化效率

1–5 x 10⁷ cfu/µg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体 (fhuA2 )

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达 E. coli 感受态细胞#C2566H

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C2566H 20 x 0.05 ml

#C2566I6 x 0.2 ml

单独出售的组分

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 BL21 源增强型菌株

 最常用的 T7 表达菌株

 菌落快速培养

 无动物来源产品

概述

为 BL21 源增强型菌株，用于 T7 表达。

基因型

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–Tet^S)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10– Tet^S)endA1 Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

• 不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率

高效级：0.6–1 x 10⁹ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C3010I6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 BL21 源增强型菌株

 以溶菌酶进行表达控制

 克隆毒性基因

 菌落快速培养

 无动物来源产品

概述

用于 T7 表达的 BL21 源增强型菌株，本底表达水平显著降低。

基因型

MiniF lysY (Cam^R) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–Tet^S)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–Tet^S) endA1 D(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体

• 通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控，从而允许克隆潜在的毒性基因

• LysY 作为特殊的 T7 溶菌酶，因缺少酰胺酶活性，从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

• 不受限于 DNA 是否甲基化

• 无需氯霉素

转化效率

高效级： 0.6–1 x 10⁹ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、氯霉素、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达 lysY/lq E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达 lysY/l^q E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C3013I 6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml

优点

 严谨的表达调控（lacI ^q）

 克隆毒性基因

 最高水平的表达控制

 BL21 源增强型菌株

 菌落快速培养

 无动物来源产品

概述

为BL21源增强型菌株，拥有最高水平的 T7 表达控制。

基因型

MiniF lysY lacI^q(Cam^R) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–Tet^S)2

[dcm] R(zgb-210::Tn10–Tet^S) endA1 Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体

• 通过 lacI^q 精确控制表达，从而允许克隆潜在的毒性基因

• 通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控，从而允许克隆潜在的毒性基因

• LysY 作为特殊的T7 溶菌酶，因缺少酰胺酶活性从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

• 不受限于 DNA 是否甲基化

• 无需氯霉素

转化效率

高效级：0.6-1 x 10⁹ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、氯霉素、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

#C3022I 6 x 0.2 ml

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml . . . . . ¥899

优点

 晶体学研究与 SeMet 标记的理想选择

 BL21 源增强型菌株

 无动物来源产品

概述

T7 表达晶体 E. coli 感受态细胞适用于高效转化和蛋白表达，专用于 x 射线结晶学研究。非常适合于对蛋白进行硒代蛋氨酸标记（蛋氨酸营养缺陷型）。

基因型

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–Tet^S)2 [dcm] R(zgb-210::

Tn10–Tet^S) endA1 metB1 D(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• T7 表达的衍生物，T7 RNA 聚合酶位于染色体上并受 lac 调控

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

转化效率

高效级：0.6–1 x 10⁹ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理,感受态细胞,蛋白表达菌株,SHuffle T7 E. coli 感受态细胞

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

SHuffle T7 E. coli 感受态细胞

#C3026J 12 x 0.05 ml

优点

 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠

 T7 表达

 K12 菌株

 无动物来源产品

概述

T7 表达菌株，在细胞质中正确折叠含有多个二硫键重组蛋白的能力更强。

基因型

F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxBrpsL150(StrR)Δgor Δ(malF)3

转化效率

1 x 10⁶ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素

* 可能观察到对低水平的链霉素存在抗性。

SHuffle 表达 E. coli 感受态细胞

#C3028J 12 x 0.05 ml

优点

 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠

 蛋白酶缺失

 BL21 B 源增强型菌株

 无动物来源产品

概述

在细胞质中正确折叠含有多个二硫键重组蛋白的能力更强。

基因型

fhuA2 [Ion] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73-::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 ΔgorΔ(mcrC-mrr)114::IS10

转化效率

1 x 10⁷ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因、壮观霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素

* 可能观察到对低水平的链霉素存在抗性。

SHuffle T7 表达 E. coli 感受态细胞

货号

规格

价格(元)

北京库存

上海库存

广州库存

成都库存

苏州库存

#C3029J

12 x 0.05 ml

3,829.00

无

优点

 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠

 T7 表达

 蛋白酶缺失的 B 菌株

 BL21 源增强型菌株

 无动物来源产品

概述

T7 表达菌株，在细胞质中正确折叠含有多个二硫键的重组蛋白的能力更强。

基因型

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [Ion] ompT ahpC galλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73-::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS)endA1 Δgor Δ(mcrC-mrr)114::IS10

转化效率

1 x 10⁷ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因、链霉素*、壮观霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素

*可能观察到对低水平的链霉素存在抗性。

SHuffle T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞

货号

规格

价格(元)

北京库存

上海库存

广州库存

成都库存

苏州库存

#C3030J

12 x 0.05 ml

3,829.00

无

优点

 表达毒性蛋白（lysY）

 有助于细胞质中蛋白质二硫键的折叠

 T7 表达

 蛋白酶缺陷的 B 菌株

 无动物来源产品

 BL21 源增强型菌株

概述

严格的 T7 表达控制，在细胞质中正确折叠含有多个二硫键重组蛋白的能力更强。

基因型

MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1[Ion] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR,

laclq)ΔtrxB sulA11 R(mcr-73-::miniTn10–TetS)2[dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 Δgor Δ(mcrCmrr)

114::IS10

转化效率

1 x 10⁷ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、氯霉素、呋喃妥因、链霉素*、壮观霉素

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、四环素

NEB 表达 l^q E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

货号

规格

价格(元)

北京库存

上海库存

广州库存

成都库存

苏州库存

#C3037I

6 x 0.2ml

2,899.00

无

单独出售的组分

SOC Outgrowth 培养基

#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . . . ¥939

优点

 BL21 源增强型菌株，最适于启动子为 P_lac、P_tac、P_trc 的表达载体

 对 IPTG 诱导的无 T7 质粒表达控制更好

 菌落快速培养

 lacI^q 降低了本底表达

 蛋白酶缺陷型菌株

 无动物来源产品

概述

特点为有效调控 IPTG 诱导的无 T7 质粒表达。

基因型

MiniF lacI^q (Cam^R) / fhuA2 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–Tet^S)2 [dcm] R(zgb- 210::Tn10–Tet^S) endA/Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

• 不受限于 DNA 是否甲基化

• 是 pUC19 或其衍生质粒最理想的表达调控菌株

转化效率

高效级：0.6–1 x 10⁹ cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、氯霉素、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,表达系统:大肠杆菌,无填料层析柱,

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

无填料层析柱

#E0001 V1套

装柱步骤

1. 装柱前先将两个垫片用20%乙醇浸泡，直至垫片浸透表面无气泡产生。

2. 用70%乙醇浸泡空柱，并冲洗。

3. 柱子下端用底帽封好，在柱中装满20%乙醇，此过程要避免气泡产生。将浸泡过的垫片放入柱底，缓慢放入柱料（2-4ml）。

4. 待柱料沉降后，在上端放上垫片，注意不要产生气泡。

5. 加入20%乙醇，取下底帽，待其流洗片刻后，以先下后上的顺序封好柱子的上下两端（注意将底帽装满液体后封住，以防产生气泡）。

6. 置于4°C。

注意事项

在装柱过程中，需小心防止气泡产生（气泡会影响流速）。

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,#2040,#2050,#2065,#2060

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiSribe RNA 合成试剂盒应用选择表

HiSribe RNA 合成试剂盒#2040

HiSribe RNA 合成试剂盒#2050

HiSribe RNA 合成试剂盒#2065

HiSribe RNA 合成试剂盒#2060

HiSribe RNA 合成试剂盒应用选择表

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen^® 突变检测试剂盒

特性

· 基于 T7 核酸内切酶的基因编辑检测

概述

EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。试剂盒操作的第一步，首先使用

Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液从待测细胞中扩增出目的基因组的靶标区域（即通过 CRISPR/Cas9、

TALENs或 ZFN等方法进行了基因编辑的区域)，经退火、延伸步骤后，形成异源双链 DNA。在扩增子池中经过多轮循环后，基因插入和缺失(Indels)等造成的突变得到富集。第二步，将退火后的 PCR 产物用 EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I 是一种结构特异性酶，可有效识别大于1个碱基的基因错配。当错配出现时，DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。

EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液，可用作 PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。对照模板和引物预混液中含有 2 种对照质粒和 1 对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火后，部分会形成含有10个碱基的插入突变，此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物，600 bp 的 DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段；而同源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I 切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源（野生型）和异源（突变）片段。

试剂盒的实验流程经过优化，通过 Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液扩增得到的 PCR 产物可以不经纯化而直接用 T7 核酸内切酶 I 进行消化。异源双链DNA 分子只需 15 分钟就可以被完全切割，随后用蛋白酶 K 将反应终止。此外， Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液还可以用于优化靶点扩增的实验。

图1：实验流程

将引物设计在已完成基因编辑位点的两侧，PCR 产物变性、退火后会生成三种结构。其中一种结构能够被 T7 核酸内切酶 I 切割（多于1个碱基错配的双链 DNA），经电泳分离和片段分析后，估算出基因编辑效率。

Engen 突变检测试剂盒组分

– Q5 热启动超保真聚合酶 2X 预混液

– NEBuffer 2

– EnGen T7 核酸内切酶 I

– 对照模板和引物预混液

– 蛋白酶 K.，分子生物级

– Quick-Load® 紫色 2-Log DNA Ladder （0.1 – 10.0 kb）

– 紫色凝胶上样染料 6X，无 SDS

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NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,RNA 帽结构类似物#S1411S,#S1407S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

RNA 帽结构类似物选择表

#S1411S RNA 帽结构类似物

#S1404S RNA 帽结构类似物

#S1407S RNA 帽结构类似物

#S1405S RNA 帽结构类似物

#S1406S RNA 帽结构类似物

RNA 帽结构类似物选择表

体外实验的初始阶段，绝大多数真核生物 mRNA 5´ 端 m⁷G 帽结构可促进翻译。对于绝大多数 RNA，帽结构都可提高 RNA 的稳定性，降低其对核酸外切酶降解的敏感性，并促进 mRNA 起始复合体的形成。在真核生物无细胞蛋白合成系统的情况下，5´ 端帽结构甚至可使原核 mRNA 的翻译效率与真核 mRNA 一样高。另外，还发现在真核生物靶 RNA 的剪切过程同样需要帽结构。

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,IMPACT™ 试剂盒

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

IMPACT™ 试剂盒

#E6901S 1 set

单独出售的相关产品

pTXB1 载体

#N6707S 10 μg

pTYB21 载体

#N6709S 10 μg

几丁质树脂

#S6651V 10 ml

#S6651S 20 ml

#S6651L 100 ml

抗 CBD 单克隆抗体

#E8034S 0.05 ml

pTWIN1 载体

#N6951S 10 μg

（不包含在试剂盒中）

特性

 单柱纯化且无需使用蛋白酶

 目的蛋白质不含来自载体的氨基酸

 可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端

 重组蛋白的连接或标记
 可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白

关于产品详细描述和 pTXB1 和 pTYB21 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 390-391 页。关于载体序列文件请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

概述

IMPACT（Intein Mediated Purificaiton with anAffinity Chitin-binding Tag）试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件（内含肽）进行一步亲和纯化重组蛋白（图 1）。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于：无需蛋白酶作用，即可将重组蛋白与其亲和标签（Tag）分离。

IMPACT 试剂盒能够融合表达含有内含肽及来自芽孢杆菌（Bacillus circulans）的几丁质结合结构域（CBD）的蛋白，融合标签可以融合到目标蛋白的 C 端（pTXB1）或 N 端（pTYB21）（图 2）。在硫醇试剂（如DTT）的参与下，内含肽进行特异性的自我剪切，释放出目的蛋白。pTXB1 载体还可用于表达和纯化C 端含硫酯键的蛋白，并用于内含肽介导的蛋白连接（IPL）。IPL 反应，即表达蛋白连接，可通过一种天然肽键将 N 端为半胱氨酸的多肽或蛋白和一段细菌表达出的 C 端为硫酯键的蛋白连接起来，此反应可用于蛋白标记或半合成。有关 IMPACT 系统和 IPL 的更多信息请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母（Sce）VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。

pTXB1 是大肠杆菌表达载体，携带有一个小的蛋白自剪切元件即来自 Mycobacterium xenopi gyrA 基因的 mini 内含肽［Mxe GyrA 内含肽，22 kDa］。内含肽经修饰后与几丁质结合域（CBD）一起共同形成一个内含肽标签。该标签可与几丁质树脂（NEB #S6651）结合。使用硫醇试剂（如 DTT）或MESNA（2-mercaptoethanesulfonicacid）（后续连接用）诱导内含肽自我剪切并释放出目的蛋白。

pTWIN1 载体可分别使用蛋白 N-端的半胱氨酸和/或C-端的硫酯键对蛋白进行分离。载体上多克隆位点经设计优化，方便目的基因与 Ssp DnaB 或 Mxe GyrA内含肽融合表达。几丁质结合域（CBD）的存在便于蛋白纯化。该载体可单独购买。

图 1：单柱亲和纯化麦芽糖结合蛋白（MBP）。泳道 1 ：未诱导的细胞提取物。泳道 2 ：诱导表达融合蛋白的细胞提取物。泳道 3：4℃ 过夜诱导裂解得到麦芽糖结合蛋白。泳道 4 ：麦芽糖结合蛋白偶联到含有 N 端半胱氨酸的肽链上。Marker M 为蛋白分子量标准。

图 2：IMPACT 系统流程图。
表 1：IMPACT 载体及其应用。

^a可使用 NEBuilder HiFi DNA 组装克隆试剂盒（NEB #E5520）进行无需限制性内切酶的构建。^b实际切割效率取决于临近的残基和融合蛋白的折叠。^c DTT 仅用于蛋白纯化。MESNA 可以使分离的蛋白拥有一个 C-末端的巯酯键，可用于连接、标记和环化。^d半胱氨酸可用来替代 DTT。

IMPACT 试剂盒组成

– 大肠杆菌表达载体：pTXB1、pTYB21 和

pMXB10 对照载体

– 几丁质树脂：纯化融合蛋白的亲和基质

（结合容量 = 2 mg/ml）

– 抗 CBD 单克隆抗体

– 二硫苏糖醇（DTT）与 SDS 上样缓冲液

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NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen^® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes

#E3322V10 rxns

特性：

 一个小时甚至更短时间内快速合成微克级的 sgRNA

概述

EnGen^™ sgRNA 合成试剂盒, S. pyogenes 能简单快速合成 sgRNA 。利用试剂盒提供的试剂和使用者自己设计的特异性 DNA 序列，单管反应 30 分钟就能获得大量 sgRNA 。

自然界中，S. pyogenes Cas9 的启动与 2 种 RNA 有关。及 crRNA 和 trRNA。crRNA 又称CRISPR RNA，包含大约 20 个核苷酸，位于PAM （Protospacer Adjacent Motif) NGG 序列的上游，与目标 DNA 反义链同源互补。另一种是 tracrRNA 又称 transactivating crRNA， tracrRNA 序列的一部分与 crRNA 互补，所形成的互补序列及二级结构可被 Cas9 识别。在实际操作中，将 tracrRNA 和 crRNA 的序列进行整合，形成一条长片段单链指导 RNA ( sgRNA) , 并与 Cas 9 形成复合体，识别并切割目标 DNA。

在 EnGen 2X sgRNA 反应混合液中，含有能被 S. pyogenes Cas 9 识别并起支架作用的特异性序列，该序列的一部分能与使用者设计的目标特异序列部分重叠。退火形成互补链后由 DNA 聚合酶进行填充。最终生成用于转录的 dsDNA 模板。本试剂盒可在一个反应中完成 dsDNA 的合成及 RNA 转录，生成具有功能的 sgRNA。

实验流程：

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

A．特异目标链包含三个部分，分别是 T7 启动子、~20 nt 目标特异性序列及与 S. pyogenes Cas9 识别支架序列互补的 14 nt 重叠区域（反应混合液中提供）。室温下，混合特异性目标链（或 EnGen sgRNA 调控序列）与 EnGen2X sgRNA 反应预混液（NTPs，dNTPs，S. pyogenes Cas9 识别支架序列）及 EnGen sgRNA 酶预混液（DNA 和 RNA 聚合酶）。B．在 37℃ 条件下，具有 14 nt 互补重叠区域的 2 个片段发生退火。C. DNA 聚合酶从 3´ 端开始延伸，形成一个双链 DNA 模板。D. RNA 聚合酶识别 T7 启动子及其下游的 dsDNA 并开始转录。最终形成的 sgRNA 包含目标特异片段、crRNA 和 tracrRNA。37℃ 条件下，单管反应 30 分钟即可完成所有步骤。

EnGen sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes 组分

– EnGen sgRNA 酶混合液

– EnGen 2X sgRNA 反应混合液，S. pyogenes

– DNase I （RNase-free）

– EnGen sgRNA control Oligo，S. pyogenes

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NEB代理,HiScribe™ T7 高效 RNA 合成试剂盒,#E2040S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiScribe™ T7 高效 RNA 合成试剂盒 #E2040S 50 次反应

特性：

 合成长链或短链 RNA 转录产物

 掺入经修饰的核苷酸

 掺入经标记的核苷酸

 利用帽类似物合成带帽 RNA

 合成高比活或低比活放射性标记的探针

概述：

NEB HiScribe T7 高效 RNA 合成试剂盒可在体外高效合成多种类型的 RNA，包括内部标记的RNA 及共转录带帽结构 RNA。利用 T7 RNA 聚合酶，该试剂盒可以从少量样本得到高效转录，单次反应可获得高达 180 μg 的产物，或利用帽类似物合成带帽 RNA，产量高达 30-40 μg。利用该试剂盒得到的 RNA 适用于多种下游应用，如 RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗等。

HiScribe T7 高效 RNA 合成试剂盒剂型灵活，使用单独的 NTP，有利于用户灵活建立反应。而 HiScribeT7 快速高效 RNA 合成试剂盒，其预混液的剂型便于快速建立反应。后者还含 DNase I 和 LiCl，可去除 DNA 模板和快速纯化 RNA。

HiScribe T7 高效 RNA 合成试剂盒组分：

– T7 RNA 聚合酶混合液

– T7 反应缓冲液（10X）

– ATP、GTP、UTP、CTP（100 mM）

– FLuc 对照模板

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,Amylose 树脂#E8021L

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

Amylose 树脂

#E8021L 100 ml

#E8021S 15 ml

#E8021V 10 ml

概述

一种亲和基质，由直链淀粉和琼脂糖构成，用来分离与麦芽糖结合蛋白融合的目的蛋白。Amylose 树脂 High Flow 是一种硬度更强的微珠，适用于全自动亲和层析系统。

结合容量

Amylose 树脂和 Amylose 树脂 High Flow 每毫升柱床体积可结合 6-8 mg MBP5-paramyosin-ΔSal 融合蛋白。

NEB代理,DNA/RNA 和蛋白质,紫色凝胶上样染料 6X

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

紫色凝胶上样染料 6X

#B7024S 4.0 ml

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

在 NEB 所有非预染的 DNA Ladder 中都包含紫色凝胶上样染料（含或不含 SDS），与其它染料相比，条带更加锐利并且消除了紫外的阴影。该预混的上样缓冲液包含两种染料，染料一（粉红/红色）和染料二（蓝色）。红色染料可以在琼脂糖电泳和非变性丙烯酰胺电泳中做为指示染料。两种染料在琼脂糖凝胶电泳过程中分离，红色染料作为指示染料与溴酚蓝迁移率一致。更具体的说，该染料不会在紫外成像时留下阴影。混合液中同时含有EDTA 用来螯合酶反应过程中的镁（最多到 10 mM），从而使反应终止。染料中同时含有聚蔗糖，相比甘油混合的染料可以得到更亮更紧实的条带。紫色的 6X 凝胶上样染料含有 SDS，条带更清晰锐利，避免由于有些内切酶切割后结合在 DNA 上引起的条带拖尾。

Spy Cas9 核酸酶,基因编辑,应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

Spy Cas9 核酸酶

#M0386M（高浓度20X）2000 pmol

#M0386S70 pmol#M0386T（高浓度20X）400 pmol

特性

·双链 DNA 位点特异性切割

·基因组编辑

概述

Cas9 核酸酶，S. pyogenes，是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的 NGG 处，在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。

来源

重组 E. coli 菌株，其克隆有来自 Streptococcus pyogenes 的 Cas9 基因。

反应条件

1X Cas9 核酸酶反应缓冲液，37℃ 温育。

质保声明

Cas9 核酸酶，S. pyogenes 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

浓度

1 μM，20 μM

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Cas9 核酸酶，S.pyogenes 序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

NEB代理,HiScribe™ T7 快速高效 RNA 合成试剂盒,#E2050S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiScribe™ T7 快速高效 RNA 合成试剂盒

#E2050S50 次反应

特性：

 合成长链或短链 RNA 转录产物

 掺入经修饰的核苷酸

 掺入经标记的核苷酸

 利用帽类似物合成带帽 RNA

 合成高比活或低比活放射性标记的探针

概述：

HiScribe T7 快速高效 RNA 合成试剂盒组分：

– T7 RNA 聚合酶混合液

– NTP 缓冲液混合液

– FLuc 对照模板

– DNase I（无 RNase）

– LiCl 溶液

NEB代理,Markers 和 Ladders,紫色凝胶上样染料 6X,无 SDS

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

紫色凝胶上样染料 6X,无 SDS #B7025S4.0 ml

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,Amylose 树脂 High Flow

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

Amylose 树脂 High Flow

#E8022L 100 ml

#E8022S 15 ml

概述

结合容量

Amylose 树脂和 Amylose 树脂 High Flow 每毫升柱床体积可结合 6-8 mg MBP5-paramyosin-ΔSal 融合蛋白。

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen^® Spy Cas9 NLS 核酸酶

#M0646M 2,000 pmol

#M0646T 400 pmol

特性

· 双链 DNA 位点特异性切割

· 基因组编辑

概述：

EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes, 是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的 NGG 处，在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。在 EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes 蛋白质的 N-端和 C-端都含有猴病毒40 (SV40) T 抗原的核定位序列 (NLS)。

来源：

重组 E. coli 菌株，含有克隆自酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）的 Cas9 基因，在其编码蛋白的 N-端和 C-端都含有猿猴病毒 40（SV40）抗原的核定位序列（NLS），N-端同时带有 6X His标签。

反应条件：

1× Cas9 核酸酶反应缓冲液
37℃ 孵育

质保声明：

EnGen Cas9 核酸酶 NLS，S. pyogenes 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

浓度：

20 μM

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NEB代理,HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒,#E2060S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒（加尾） #E2060S 20 次反应

特性

 合成带帽和尾的 mRNA

 掺入经修饰的核苷酸

 用 E. coli Poly(A) 聚合酶合成 Poly(A)尾
 包括模板去除和 mRNA 纯化试剂

概述

大多数真核 mRNA 的高效翻译需要在 5´ 末端有一个 7-甲基鸟苷帽结构， 3´ 末端有一个 Poly（A）尾。用 DNA模板编码的 Poly（A）尾， HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒（加尾）可以快速体外合成带帽带尾的 mRNA。使用 T7 RNA 聚合酶通过共转录，将抗- 反向帽类似物（ARCA， NEB #S1411）加到 mRNA 上。利用 ARCA/NTP 混合液、 T7 RNA 聚合酶混合液和适当的 DNA 模板，很容易建立转录反应。试剂盒也可以将 5mCTP、 Pseudo-UTP 和其它修饰的核苷酸掺入 mRNA。经 DNase I 短暂温育可以去除模板 DNA， Poly（A）聚合酶为加帽的 mRNA 加 Poly（A）尾。试剂盒合成的 mRNA 可以用于细胞转染、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗。

HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒（带尾）组成

– T7 RNA 聚合酶混合液

– ARCA/NTP 混合液

– DNase I（无 RNase）

– E. coli Poly(A) 聚合酶

– Poly(A) 聚合酶反应缓冲液

– LiCl 溶液
– CLuc 对照模板

优势

• 快速建立反应体系和简单的操作流程

• 可以引入 5mCTP、Pseudo-UTP 和其它经修饰的 CTP 和 UTP
• 高质量的各种组分确保 mRNA 的完整性

NEB代理,DNA Ladders,Lambda PFG Ladder#N0341S

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Lambda PFG Ladder

#N0341S 50 gel lanes

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

图片显示为Lambda PFG Ladder 以 CHEF装置进行脉冲场凝胶电泳的结果。电泳条件：1% 琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为 0.5 X TBE （50 mM Tris-HCL，50 mM boric acid，1 mM EDTA，使用 Milli-Q® 水配置），电压 4.5 volts/cm，脉冲时间 5-120 秒，15℃ 条件下电泳 48 小时。胶图上显示 15-21 条 Lambda DNA 条带。推荐上样量为 5-10 μl。10μl 的胶条（注射器上的一小刻度）含约 0.5 μg 的 DNA。每管胶可使用 50 次以上上样量。小心的从注射器中（GelSyringe）推出琼脂糖胶，用锋利的刀片切下胶条。一小块胶条足够凝胶电泳的一条泳道。将胶条置于加样孔前缘，并用融胶封埋（融胶温度约 42-45℃）。注意不要形成气泡。勿将胶条融化，否则会使 Lambda DNA 共聚体变性，导致 DNA 断裂。在凝胶灌注之前，不要将 Lambda Ladder 胶条粘在胶梳上。固体胶受热会导致 Lambda DNA 共聚体变性断裂。

浓度:50 μg/ml。

Lambda PFG Ladder 是专为脉冲场凝胶电泳（PFG）设计的分子量标准参照，它以胶条的形式贮存于注射器（GelSyringe™）中，可满足 50 次上样。递增的 Lambda DNA （cl857 ind 1 Sam7）共聚体包埋于 1% LMP 琼脂糖凝胶中。分子量范围：48.5-1,018 kb。

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,抗MBP单克隆抗体#E8032L

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

抗 MBP 单克隆抗体

#E8032L 0.25 ml

#E8032S 0.05 ml

概述

抗 MBP 单克隆抗体是鼠抗麦芽糖结合蛋白抗体，属 IgG2a 型抗体。由组织培养上清经 protein A 亲和层析纯化而得。

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen^® Spy Cas9 切刻酶

#M0650S70 pmol

#M0650T400 pmol

特性

体外切刻 dsDNA。

通过直接导入有活性的切刻酶复合物进行基因编辑。

概述

EnGen^®Spy Cas9 切刻酶是 Cas9 核酸酶的突变体，其在 RuvC 核酸酶结构域中引入了点突变（D10A）。EnGen^®Spy Cas9 切刻酶可以产生切刻，但不能切割 DNA。利用 EnGen Cas9 切刻酶近距离地靶向两个目标位点，产生 DNA 双链断裂，并且降低脱靶效应。与 EnGen sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes （NEB #E3322）兼容。

反应条件

1X NEBuffer™ 3.1，37℃ 温育

热失活

65°C，5 min

浓度

1 µM，20 µM

质保声明

EnGen^®Spy Cas9 切刻酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

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NEB代理,#N0342S,MidRange PFG Marker,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

MidRange PFG Marker

#N0342S 50 gel lanes

概述

MidRange PFG Marker 是多联体 λ DNA，由提取自 λ 噬菌体（cl857 ind 1 Sam7） DNA 以及经 XhoI 消化上述 DNA 后的片段组成，包埋于 1% LMP 琼脂糖凝胶中，以胶条的形式贮存于胶助推管中。XhoI 消化 λ DNA后生成 15.0 kb 和 33.5 kb 片段，这些片段与完整的 λ DNA 形成多联体 DNA 。MidRange PFG Marker 是专门为脉冲场凝胶电泳（PFG）设计的分子量标准参照，分子量范围：15-291 kb。

浓度

50 μg/ml。

使用建议

Midrange PFG Marker：图片显示为 Midrange PFG Marker 以 CHEF 装置进行脉冲场凝胶电泳的结果。电泳条件：0.5X TBE 电泳缓冲液（使用 Milli-Q® 水配置），15℃ 条件下电泳 24 小时。

PFG Ladder 使用建议：推荐上样量为 5-10 μl。10 μl 的胶条（注射器上的一小刻度）含约 0.5 μg 的 DNA。每管胶可使用 50 次以上。

小心地从注射器中（GelSyringe）推出琼脂糖胶，用锋利的刀片切下胶条。一小块胶条足够凝胶电泳的一条泳道。将胶条置于加样孔前缘，并用融胶封埋（融胶温度约 42-45℃）。注意不要形成气泡。

勿将胶条融化，否则会使 Lambda DNA 共聚体变性，导致 DNA 断裂。

在凝胶灌注之前，不要将 Lambda Ladder 胶条粘在胶梳上。固体胶受热会导致 Lambda DNA 共聚体变性断裂。

1% 琼脂糖凝胶，6 V/cm，15℃ 电泳 24 小时，脉冲时间为 1-25 秒。

#E2065S NEB代理,HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒,RNA 合成

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒

#E2065S 20 次反应

特性

 以编码 Poly（A）尾的 DNA 为模板，合成带帽的 mRNA

 掺入修饰的核苷酸
 包括模板去除和 mRNA 纯化试剂

概述

大多数真核 mRNA 的高效翻译需要在 5´ 末端有一个 7-甲基鸟苷帽结构，3´ 末端有一个 Poly(A) 尾。HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒可以用来合成带帽的 mRNA。使用 T7 RNA 聚合酶通过共转录，将抗-反向帽类似物（ARCA，NEB #S1411）加到 mRNA 上。利用 ARCA/NTP 混合液、T7 RNA 聚合酶混合液和适当的 DNA 模板，很容易建立转录反应。试剂盒也可以用于将 5mCTP、Pseudo-UTP 和其它修饰的核苷酸引入 mRNA。试剂盒合成的 mRNA 可以用于转染、体外翻译和 RNA 疫苗。试剂盒包含 DNA 模板去除和 mRNA 快速纯化的 DNase I 和 LiCl。

HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒组成

– T7 RNA 聚合酶混合液

– ARCA/NTP 混合液

– DNase I（无 RNase）

– LiCl 溶液
– CLuc 对照模板

优势

• 快速建立反应体系和简单的操作流程

• 可以引入 5mCTP、Pseudo-UTP 和其它修饰的 CTP 和 UTP
• 高质量的各种组分确保 mRNA 的完整性

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：大肠杆菌

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

抗 CBD 单克隆抗体

#E8034S 0.05 ml

特性

 单柱纯化且无需使用蛋白酶

 目的蛋白质不含来自载体的氨基酸

 可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端

 重组蛋白的连接或标记
 可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白

关于产品详细描述和 pTXB1 和 pTYB21 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 355-356 页。载体序列文件请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

概述

IMPACT（Intein Mediated Purificaiton with an Affinity Chitin-binding Tag）试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件（内含肽）进行一步亲和纯化重组蛋白（图1）。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于：无需蛋白酶作用，即可将重组蛋白与其亲和标签（Tag）分离。

IMPACT 试剂盒能够融合表达含有内含肽及几丁质结合结构域（CBD）的蛋白，融合标签可以融合到目标蛋白的 C 端（pTXB1）或 N 端（pTYB21）（图 2）。在硫醇试剂（如 DTT）的参与下，内含肽进行特异性的自我剪切，释放出目的蛋白。pTXB1 载体还可用于表达和纯化 C 端含硫脂键的蛋白，并用于内含肽介导的蛋白连接（IPL，图 3）。IPL 反应，即表达蛋白连接，可通过一种天然肽键将 N 端为半胱氨酸的多肽或蛋白和一段细菌表达出的 C 端硫脂键蛋白连接起来，此反应可用于蛋白标记或半合成。

pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母（Sce）VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。

pTXB1 是大肠杆菌表达载体，携带有一个小的蛋白自剪切元件即来自 Mycobacterium xenopi gyrA 基因的 mini 内含肽［Mxe GyrA 内含肽，22 kDa］。蛋白自剪切元件经修饰后与来自芽孢杆菌（Bacillus circulans）的几丁质结合域（CBD）一起共同形成一个内含肽标签。该标签可与几丁质珠（NEB #S6651）结合。使用硫醇试剂（如 DTT）或 MESNA（2-mercaptoethanesulfonic acid）（后续连接用）诱导内含肽自我剪切并释放出目的蛋白。

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：大肠杆菌
图 1：单柱亲和纯化麦芽糖结合蛋白。泳道 1：未诱导细胞提取物。泳道 2：诱导表达融合蛋白细胞提取物。泳道 3：4℃ 过夜诱导裂解得到麦芽糖结合蛋白。泳道 4：麦芽糖结合蛋白偶联到含有 N 端半胱氨酸的肽链上。Marker M：蛋白分子量标准（NEB #P7703）。

图 2：IMPACT 系统流程图

图 3：内含肽介导的蛋白连接（IPL）流程图。

表 1：IMPACT 载体及其应用。

^a实际切割效率取决于临近的残基和融合蛋白的折叠。^bDTT 仅用于蛋白纯化。MESNA 可以使分离的蛋白拥有一个 C-末端的巯酯键，可用于连接、标记和环化。^c 半胱氨酸可用来替代 DTT。

iMPACT 试剂盒组成

– 大肠杆菌表达载体：pTXB1、pTYB21 和 pMXB10 对照载体

– 几丁质珠：纯化融合蛋白的亲和基质（结合容量 = 2 mg/ml）

– 抗 CBD 单克隆抗体
– DTT 与 SDS 上样缓冲液

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NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen^® Spy dCas9（SNAP-tag®）核酸酶 #M0652S 70 pmol

#M0652T400 pmol

特性

·体外切刻 dsDNA。

·通过直接导入有活性的切刻酶复合物进行基因编辑。

概述

EnGen^®Spy dCas9（SNAP-tag）核酸酶是 Cas9 核酸酶的无活性突变体，保留了与 DNA 的结合活性。N 端 SNAP-tag 标签可与荧光基团、生物素和许多其它利于可视化和靶标富集的偶联物共价结合。与 EnGen sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes （NEB #E3322）兼容。

反应条件

1X NEBuffer™ 3.1，37℃ 温育

浓度

1 µM，20 µM

质保声明

EnGen^®Spy dCas9（SNAP-tag）核酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

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NEB代理,HiScribe™ SP6 RNA 合成试剂盒,#E2070S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiScribe™ SP6 RNA 合成试剂盒 #E2070S 50 reactions

特性

 合成长链或短链 RNA 转录产物

 掺入经修饰的核苷酸

 掺入经标记的核苷酸

 利用帽类似物合成带帽 RNA

 合成高比活或低比活放射性标记的探针

概述：

HiScribe SP6 RNA 合成试剂盒利用 SP6 RNA 聚合酶进行 RNA 体外转录。该试剂盒适用于高效合成 RNA 转录子，并可引入帽类似物（试剂盒中不包含）或经修饰的核苷酸（试剂盒中不包含）以获得带帽、生物素标记或染料标记的 RNA。试剂盒同样适用于合成高比活的放射性 RNA 作为探针或靶标。

利用该试剂盒得到的 RNA 适用于多种下游应用，如RNA 结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析或凝胶迁移滞后实验用探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射和体外翻译等。

对于 25 μl 反应体系，试剂盒有足够 50 次反应使用的试剂量。使用 1 μg SP6 对照模板 DNA，一次标准反应 RNA 产量 ≥ 80 μg。每个试剂盒可生成 ≥ 4 mg 的 RNA。

HiScribe SP6 RNA 合成试剂盒组分：

– SP6 反应缓冲液（10X）

– ATP（Tris）、GTP（Tris）、UTP（Tris）、

CTP（Tris），（50 mM）

– SP6 对照模板

– SP6 RNA 聚合酶混合液

– DNase I（无 RNase）

– LiCl 溶液

抗 MBP 磁珠

概述

小量分离纯化 MBP（麦芽糖结合蛋白）融合蛋白的亲和介质。Amylose 或抗 MBP 单克隆抗体共价耦联到一种顺磁颗粒上，在较宽的 pH 范围内稳定且致密。

结合容量

1 mg Amylose 磁珠能结合 10-20 μg MBP 融合蛋白。
1 mg 抗 MBP 磁珠能结合 5 μg MBP-paramyosin 融合蛋白。

NEB代理,#N0468L,Quick-Load 1 kb DNA Ladder,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load 1 kb DNA Ladder

#N0468L 375 gel lanes

#N0468S 125 gel lanes

概述

NEB 的 2-Log、1 kb 和 100 bp DNA Ladder 现均提供四种不同剂型。您可以选择常规型的 Ladder、以非荧光紫色染料或者溴酚蓝为指示剂的 Quick-Load 型或含三种指示剂的 TriDye 型，便于观察 DNA 迁移。

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

特性

• 直接上样

• 25℃ 条件下稳定

• 条带亮度均一

• 易于识别的参照带
• 样品粗略定量

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen^® Lba Cas12a（Cpf1）核酸酶

#M0653S

70 pmoles

#M0653T

2,000 pmoles

特性

· 体外切割 dsDNA。

· 通过直接导入有活性的核酸酶复合物进行基因编辑。

概述

EnGen^®Lba Cas12a（Cpf1）核酸酶识别富含 T 的 TTTN PAM 序列，为基因打靶开辟了额外的基因组区域。所需 gRNA短，仅40-44 个碱基。其有两个核定位信号，提高运输到细胞核的效率。其切割产物为5′ 突出端。该酶的活性温度区间为 16℃-48℃。与氨基酸球菌（Acidaminococcus）的同源酶相比，在更低温度下活性依然良好，能用于编辑冷血动物基因组，如斑马鱼和非洲爪蟾等。高浓度酶可用于显微注射、电转和脂质体转染.

反应条件

1X NEBuffer™ 2.1，37℃ 温育

热失活

65°C，10 min

浓度

1 µM，100 µM

质保声明

EnGen^®Lba Cas12a（Cpf1）经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

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Lba Cas12a（Cpf1）核酸酶序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,抗 MBP 单克隆抗体,HRP 标记(停产有替代)

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

抗 MBP 单克隆抗体，HRP 标记(停产有替代) #E8038S0.05 ml

停产通知

该产品已停产，替代产品：抗 MBP 单克隆抗体（NEB #E8032）

概述

抗 MBP 单克隆抗体（HRP 标记），是鼠抗麦芽糖结合蛋白抗体，属 IgG2a 型抗体。共价耦联辣根过氧化物酶并经纯化而得。

#E2080S NEB代理,HiScribe™ T7 mRNA 合成试剂盒,含 CleanCap® Reagent AG

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiScribe™ T7 mRNA 合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）

#E2080S 20 次反应

产品特点

·使用 1 µg 对照模板，单次反应可转录高达 90 µg Cap-1 mRNA

·独立包装的 NTP 适用于全部/部分修饰 NTPs 替换

·试剂盒包含模板去除和 RNA 纯化试剂

·试剂盒包含线性对照模板，用于验证 CleanCap® Reagent AG 的 RNA 合成效果

产品概述

对于大多数真核生物来说，mRNA 需要 5’端带有 7-甲基鸟苷（m7G）帽结构，3’端带有 poly（A）尾才能有效翻译。HiScribe^™ T7 mRNA合成试剂盒（含 CleanCap^® Reagent AG）优化了 RNA 合成配方，利用三核苷酸帽结构类似物技术，通过一步共转录加帽即可获得带有天然的 Cap-1 结构的 mRNA，且不会影响 RNA 产量。使用含 T7 启动子序列、AG 起始的目标序列和 poly（A）尾编码序列的 DNA 模板，即可转录带有 5’-m7G Cap-1 和 poly（A）尾的 mRNA，该 mRNA 能够有效翻译并能逃避细胞先天免疫反应。

HiScribe^™ T7 mRNA合成试剂盒（含 CleanCap^®Reagent AG）包含独立包装的 NTP 和 CleanCap Reagent AG，适用于全部/部分修饰 NTPs 替换，试剂盒总产量为 1.8 mg mRNA。使用该试剂盒合成的 Cap-1 mRNA 适用于多种应用，包括：转染、显微注射、体外翻译、临床前 mRNA 治疗研究以及 RNA 结构和功能分析。

该试剂盒可完成 20 次共转录反应（20 μl 体系）。使用 1 μg CLuc AG 对照模板 DNA 进行标准反应，可转录≥90 μg RNA。每个试剂盒的产量≥1.8 mg RNA。

图 1：CleanCap Reagent AG 分子结构

图 2：使用 CleanCap Reagent AG 时，启动子和起始序列示意图

图 3：CleanCap Reagent AG 比 ARCA 的mRNA 合成产量更高

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

所有反应均使用 5 mM CTP、5 mM UTP 和 6 mM ATP 进行。标准 IVT 反应使用 5 mM GTP，不添加帽结构类似物。ARCA 反应使用 4：1 的 ARCA：GTP（4 mM：1 mM）。含 CleanCap Reagent AG 的 IVT 反应使用 5 mM GTP 和 4 mM CleanCap Reagent AG，反应体系分别参照以下说明书配制：标准 mRNA 合成和 HiScribe T7 mRNA合成试剂盒（含 CleanCap Reagent AG））。反应在 37℃ 下孵育 2 小时，通过 NanoDrop 检测纯度和定量。

NEB代理,#N0469S,Quick-Load 1 kb Plus DNA Ladder,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load 1 kb Plus DNA Ladder

#N0469S 125–250 gel lanes

特性

• 直接上样

• 25℃ 条件下稳定

• 条带亮度均一

• 易于识别的参照带
• 样品粗略定量

概述

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen^® Sau Cas9 核酸酶

#M0654S70 pmol

#M0654T400 pmol

特性

·体外切割 dsDNA

·通过直接导入有活性的核酸酶复合物进行基因编辑

概述

EnGen ® Sau Cas9 核酸酶识别 5′-NNGRRT-3′ PAM 序列，切割位于 PAM 序列上游的第 3 个碱基位置，切割后为平末端。其双端核定位序列（NLS）可提高运输到细胞核的效率。高浓度酶可用于显微注射、电转和脂质体转染。

反应条件

1X NEBuffer™ 3.1，37℃ 温育

热失活

65°C，5 min

浓度

1 µM，20 µM

质保声明

EnGen^®Sau Cas9 核酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

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Sau Cas9 核酸酶序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

NEB代理 , 基因编辑 , 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,pMAL™ 蛋白融合表达系统#E8200S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代）

#E8200S 1 set

停产通知

产品于2020 年 6 月 30 日停产，替代产品为：NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统（E8201）

单独出售的相关产品

Amylose 树脂

#E8021V 10 ml

#E8021S 15 ml

#E8021L 100 ml

Xa 因子蛋白酶

#P8010V 25 μg

#P8010S 50 μg

#P8010L 250 μg

pMAL-p5X 载体

#N8109S 10 μg

pMAL-c5X 载体

#N8108S 10 μg

特性

 超过 75% 的蛋白可获得高效表达，蛋白产量可达 100 mg/L

 可在细胞质或周质中表达：在周质或SHuffle® 细胞质中表达均可提高二硫键的形成，促进蛋白折叠

 增强可溶性：MBP 融合蛋白增强了蛋白质在大肠杆菌中的可溶性
 采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性产生影响

对于产品详细描述和 pMAL-p5X 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 386 页。

概述

pMAL 系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL 载体含有编码麦芽糖结合蛋白（maltosebinding protein, MBP）的大肠杆菌 malE 基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达 N 端带有 MBP 的融合蛋白。通过“P_tac”强启动子和 MBP 翻译起始信号使克隆基因获得高效表达，并利用 MBP 对麦芽糖的特异性结合实现融合蛋白的一步亲和纯化（图 1）。

此系统的 pMAL 载体在邻近多克隆位点处含有一段编码特异性蛋白酶识别位点的序列，从而便于纯化后将目的蛋白与 MBP 切割分离，并且目的蛋白不含任何来自载体的氨基酸。为了实现这一目的，多克隆位点中有一限制性内切酶识别位点正好位于特异性蛋白酶识别位点处，同时也是目的基因插入的位点。

pMAL 系列载体可从 1 升的培养液中表达出 100 mg 的融合蛋白。大部分情况下，表达出的融合蛋白是可溶的，因为 MBP 已经被证实可提高大肠杆菌中表达蛋白的可溶性。尽管没有一种表达系统适用于所有克隆基因，但 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统经证实：在被检测的已知蛋白中，有超过 75% 能表达出稳定产量。

由于 pMAL-c5X 载体上删除了 malE 信号序列，因此融合蛋白在细胞质中表达。而 pMAL-p5X 载体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜进入细胞周质。 NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：大肠杆菌

图 1：pMAL 系统流程示意图。

pMAL 蛋白融合表达和纯化系统组成

– pMAL-c5X, pMAL-p5X

– Amylose 树脂（结合容量～6-8 mg/ml 体积）

– Xa 因子蛋白酶

– MBP5（SDS-PAGE 电泳用 marker）

– MBP5-paramyosin-ΔSal

（Xa 因子蛋白酶切割的对照蛋白）

– E. coli ER2523（NEB 表达用感受态细胞）

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NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

SP6 RNA 聚合酶

#M0207S2,000 units

特性

 制备放射标记的 RNA 探针

 合成用于体外翻译的 RNA

 合成用于结构、加工和催化性能研究的 RNA
 合成 RNA 反义链，调控基因表达

概述

T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体，可将目的基因序列克隆到 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中，以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。用 T7 和 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 具有 mRNA 的生物特性，可进行准确剪切。实验证实，用靶标 DNA 反向转录所产生的反义 RNA 能特异性阻断体内 mRNA 的翻译。由于RNA/DNA 杂交体比 RNA/RNA 和 DNA/DNA 杂交体更稳定，因此核酸杂交反应中的检测信号会更强。

来源

SP6 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带克隆于 Salmonella typhimurium LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。 T7 RNA 聚合酶来自重组 E.coli BL21 菌株，该菌株携带含可诱导的 lac UV5 启动子及其控制的 T7 基因 I 的 pAR1219 载体。T3 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带可表达T3 基因载体。

反应条件

1X RNAPol 反应缓冲液 [40 mM Tris-HCl（pH 7.9），6 mM MgCl₂， 2 mM 亚精胺，1 mM DTT］。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP（不随酶提供）和带有启动子的模板 DNA，在 37 ℃ 温育。

质保声明

无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指在 37℃ 条件下， 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。

浓度

T3 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶：20,000 units/ml。

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有关该产品特性和应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

NEB代理 , 基因编辑 , 基因编辑相关核酸酶

产品资料 – 基因编辑 – 基因编辑相关核酸酶

Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)

#M0665S 50 pmol

特性

·TtAgo 来自嗜热栖热菌，是一种可编辑的核酸内切酶，在 5’ 磷酸化的单链 DNA（ssDNA）指导下能够切割底物靶序列，在底物与向导 DNA 互补序列的磷酸二酯键处产生断裂。

·所需 5’ 磷酸化 ssDNA 长度短，仅 16 -18 nt，成本低，可用 NEB T4 PNK 进行磷酸化

·向导/靶标序列的选择不受相邻序列限制

·对 ssDNA 和大多数双链 DNA（dsDNA）底物活性较高（在 dsDNA 底物上产生切刻），对 ssRNA 底物也有一定活性

·适用于体外应用

·参考 Tth Argonaute (TtAgo) 实验的优化指南

概述

TtAgo 是一种来自革兰氏阴性嗜热栖热菌（Thermus thermophiles）的原核 argonaute 蛋白，在 5′-磷酸化单链 DNA（16 – 18 nt）指导下，可发挥 DNA 介导的核酸内切酶作用。在二价 Mg²⁺（或Mn²⁺）金属离子存在时，该酶具有类 RNase H 活性（见产品使用说明 #1），并在与 DNA 向导链第 10 和 11 个碱基互补的碱基处切割底物。

TtAgo 工作示意图

TtAgo 在 65-85℃ 时具有活性（见产品使用说明 #2），对 ssDNA 活性最高，其次是 dsDNA，对单链 RNA（ssRNA）底物活性最低。该酶与单链向导 DNA 协同作用时，不会切割 dsDNA ，而只是切刻与向导 DNA 链互补的底物 DNA 链。该酶对双链 RNA（dsRNA）底物无活性。切割后的 5’ 和 3’ 末端产物可进行下游连接^（1）。结果表明，在某些情况下，反应中加入热稳定单链 DNA 结合蛋白（ET-SSB，NEB #M2401）和/或热稳定解旋酶有助于切割 dsDNA 底物。

无向导 DNA 的 TtAgo 会通过 “剪切” 来降解 dsDNA，这被认为是 TtAgo 从入侵的或外源 DNA 中自发产生向导 DNA 的机制。^（2）为防止这种非特异性活性的产生，向导 DNA 的摩尔量应超过 TtAgo 量的 5 倍。此外，向导链要与 TtAgo 一起在～75℃ 条件下孵育 10-30 分钟，形成核蛋白复合物后再加入底物进行反应。更多详细信息，请参阅操作步骤、说明书和使用说明。

TtAgo 适用于体外应用。

随酶提供的试剂

ThermoPol 反应缓冲液套装

浓度

1 µM

来源

TtAgo 纯化自携带革兰阴性嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）克隆基因的大肠杆菌菌株，该克隆基因是 N 端含 6X His 标记的融合基因。

保存温度

-20°C

质保声明

TtAgo 蛋白经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

1. Hunt, E. A., Evans Jr, T. C., & Tanner, N. A. (2018). Single-stranded binding proteins and helicase enhance the activity of prokaryotic argonautes in vitro. PloS One. 13 (8), e0203073.

2. Swarts, D., Szczepaniak, M., Sheng, G., Chandradoss, S., Zhu, Y., & Timmers, E. et al. (2017). Autonomous Generation and Loading of DNA Guides by Bacterial Argonaute. Molecular Cell.. 65 (6), 985-99.

NEB代理,DNA/RNA 和蛋白质,超螺旋 DNA Ladder

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

超螺旋 DNA Ladder

#N0472S100 gel lanes

概述

超螺旋 DNA Ladder 由 9 种已获专利的超螺旋质粒构成，分子量大小从 2 到 10 kb，适用于琼脂糖凝胶电泳的超螺旋分子量标准。其中 5 kb 质粒对应的条带亮度增强可作为参考条带。

来源

9 种已获专利的质粒，经纯化、酚抽提后溶于 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）和 1 mM EDTA 溶液。

浓度

500 μg/ml。

注意

该 Ladder 可能含有极微量切刻 DNA 和大于 10 kb 的二聚体。为减少超螺旋 DNA 被切刻，应使用无菌枪头分装并避免反复冻融。超螺旋质粒的迁移率会随琼脂糖凝胶浓度、电泳缓冲液和电泳条件的改变而变化。质粒应用 TE 或者其它低离子强度溶液稀释，dH2O 稀释会导致 DNA 降解。

使用建议

使用前短暂离心并小心混匀。推荐使用样品稀释液稀释 0.5 μg（1 μl）超螺旋 DNA Ladder。该 Ladder 不能对 DNA 进行精确定量，但是对分子量大小相近的样品可以粗略定量。NEB 的超螺旋 DNA Ladder 中每条带相对应的DNA 大致含量如下（以 0.5 μg 上样量为例）：

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

0.5 μg 超螺旋 DNA Ladder
0.8% TAE 琼脂糖凝胶，EB 染色。

NEB代理,T7 RNA 聚合酶,RNA 合成,#M0251L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

T7 RNA 聚合酶

#M0251L 25,000 units

#M0251S 5,000 units

特性

 制备放射标记的 RNA 探针

 合成用于体外翻译的 RNA

 合成用于结构、加工和催化性能研究的 RNA
 合成 RNA 反义链，调控基因表达

概述

来源

反应条件

质保声明

无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。

单位定义

1 单位指在 37℃ 条件下， 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。

浓度

T3 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶：20,000 units/ml。

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NEB代理,蛋白表达和纯化技术,NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

NEBExpress^TMMBP 融合表达及纯化系统

#E8201S 1 set

产品特点

该产品可直接替换 NEB #E8200，pMAL™ 蛋白融合表达系统

NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统利用 Ptac 超强启动子和麦芽糖结合蛋白（MBP）的翻译起始信号来增强目标蛋白在大肠杆菌中的溶解度和表达水平。所得产物是 MBP 融合蛋白，后续可通过亲和反应进行纯化。

特性

·稳定可靠的大肠杆菌表达系统：蛋白产量高（可达 100 mg/L）

·目标蛋白与 MBP 融合表达可增强其在大肠杆菌中的溶解度（1）

·两步纯化：第一步：直链淀粉洗脱后使用 TEV 蛋白酶切割，第二步：经镍柱填料分离可获得高纯度的无标签的靶蛋白

·使用麦芽糖进行温和洗脱；无需洗涤剂或刺激性变性剂

概述

在 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统中，pMAL-c6T 载体提供了一种将克隆基因或开放阅读框编码的蛋白质表达和纯化的方法。首先，将目标克隆基因插入大肠杆菌编码麦芽糖结合蛋白（MBP）的 malE 基因框架下游；这样构建的载体可表达 MBP 融合蛋白（2,3）。pMAL-c6T 载体表达 N 端标记六组氨酸的 malE 基因（缺少分泌信号序列，并且经改造可以与直链淀粉更紧密地结合），其后是 TEV 蛋白酶识别序列、多克隆酶切位点和三位终止密码子。pMAL-c6T 载体在细胞质中表达 MBP 融合蛋白。这种方法使用“tac”强启动子和 malE 翻译起始信号，从而能够使克隆序列进行高水平表达（4,5）。然后，利用 MBP 与麦芽糖的亲和特性，使用直链淀粉树脂对融合蛋白进行一步纯化（6）。

直链淀粉纯化后，可以使用 TEV 蛋白酶将 MBP 标签从目标蛋白上切下来，目标蛋白不残留任何载体衍生基团。MBP 标签和 TEV 蛋白酶均带有 His 标签，因此可轻松从反应中去除。将上述反应产物经 NEBExpress 镍柱填料（NEB＃S1428）分离，可去除 MBP 标签和 TEV 蛋白酶，从而在收集管液中可获得目标蛋白。目标蛋白产量最高可达 100 mg/L，一般产量为 10–40 mg/L。

图 1：NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统的原理图

图 2：使用 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统进行蛋白表达

亲和纯化的 MBP6-TEV-ParamyosinΔSal 蛋白使用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。泳道 1：蛋白标准品。泳道 2：未处理的细胞。泳道 3：转入目标基因的细胞。泳道 4：使用麦芽糖从直链淀粉柱上洗脱下来的纯化融合蛋白。泳道 5：TEV 蛋白酶切割后的纯化蛋白。泳道 6：NEBExpress 镍柱填料收集管液分离的目标蛋白。

试剂盒组分

随产品提供如下试剂

名称	储存温度(℃)	浓度
pMAL-c6T DNA		200 µg/ml
Amylose Resin	4
TEV Protease	-20	10,000 units/ml
TEV Protease Reaction Buffer	-20	10 X
Anti-MBP Monoclonal Antibody	-20
MBP6 Protein	-20	40 µg/ml
MBP6-TEV-Paramyosin ΔSal	-20	5 mg/ml
E. coli ER2523 (NEB Express) (Glycerol Stock)	-20

储存温度

-20℃

NEB代理,Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质),Quick-Load Purple 1 kb Plus DNA Ladder

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load Purple 1 kb Plus DNA Ladder

#N0550L 375-750 gel lanes

#N0550S 125-250 gel lanes

优点

• 直接上样

• 25℃ 条件下稳定

• 条带亮度均一

• 易于识别的参照带
• 样品粗略定量

概述

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,pMAL-c6T 载体#N0378S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

pMAL-c6T 载体

#N0378S 10 µg

特性

·pMAL-c6T 是 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统（NEB＃E8201）中推荐的载体

·目标蛋白与 MBP 融合表达可显著增强其在大肠杆菌中的溶解度和正确折叠（1）

·载体包含 His-tag 和 TEV 蛋白酶识别位点，使用 TEV 蛋白酶（NEB＃P8112）可将目标蛋白从 MBP 上切下来

·两步纯化：Amylose 树脂洗脱后进行 TEV 蛋白酶切割和 Ni 树脂分离，终产物为高纯度、无标签的靶蛋白

·经设计改造，MBP 可更紧密的结合到 Amylose 树脂上。

·具有氨苄青霉素抗性

概述

pMAL-c6T 载体提供了一种从克隆基因或开放阅读框到蛋白表达的方法。克隆基因插入到大肠杆菌的 malE 基因下游，malE 基因编码麦芽糖结合蛋白（MBP），从而使 MBP 融合蛋白在细胞质中表达（1，2）。MBP 经设计改造，可更紧密的结合到 Amylose 树脂上。该方法利用 “tac” 强启动子和 malE 翻译起始信号，使克隆序列得到高水平表达（3，4），同时可利用 MBP 对麦芽糖的亲和力，一步纯化融合蛋白（5）。该载体表达 N 端六组氨酸标记的 malE 基因（缺少分泌信号序列），随后是包含 TEV 蛋白酶识别序列的多克隆酶切位点，以及三位终止密码子。从而可在纯化后，使用 TEV 蛋白酶将 MBP 从目标蛋白上切下来。该载体还携带 lacIq 基因，该基因编码 Lac 阻遏蛋白。在没有 IPTG 诱导的情况下，可使 Ptac 低水平表达

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：大肠杆菌

pMAL-c6T 载体的 malE 基因上具有明确的信号序列缺失，箭头指示转录方向，多克隆酶切位点（MCS）中标注了限制性内切酶位点

产品来源

NEB-10 beta competent E. coli （pMAL-c6T）

亲和标记

麦芽糖结合蛋白（MBP）

储存温度

-20°C

序列信息

Fasta GenBank

NEB代理,Quick-Load紫色100 bp DNA Ladder,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load 紫色 100 bp DNA Ladder

#N0551L375 gel lanes

#N0551S125 gel lanes

优点

• 直接上样

• 25℃ 条件下稳定

• 条带亮度均一

• 易于识别的参照带
• 样品粗略定量

概述

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理 ,热稳定无机焦磷酸酶, RNA 合成,#M0296L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

热稳定无机焦磷酸酶

#M0296L 1,250 units

#M0296S 250 units

特性

 增强 DNA 复制

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

概述

无机焦磷酸酶（PPase）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。
P₂0₇^–4 + H₂0 → 2HP0₄^–2

来源

重组 E. coli 菌株，携带从极度耐热的 Thermococus litoralis 中克隆的无机焦磷酸酶基因。

单位定义

1 单位指标准反应条件下 [0.5 ml 反应体系，50 mM Tricine（pH 8.5），1 mM MgCl₂ 和 0.32 mM PPi，75℃ 反应 10 分钟]，每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐的酶量。

浓度

2,000 units/ml。

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,pTXB1 载体 #N6707S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

pTXB1 载体

#N6707S 10 μg

特性

 单柱纯化且无需使用蛋白酶

 目的蛋白质不含来自载体的氨基酸

 可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端

 重组蛋白的连接或标记
 可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白

关于产品详细描述和 pTXB1 和 pTYB21 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 355-356 页。载体序列文件请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

概述

IMPACT（Intein Mediated Purificaiton with an Affinity Chitin-binding Tag）试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件（内含肽）进行一步亲和纯化重组蛋白（图1）。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于：无需蛋白酶作用，即可将重组蛋白与其亲和标签（Tag）分离。

pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母（Sce）VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：大肠杆菌
图 2：IMPACT 系统流程图

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：大肠杆菌
图 3：内含肽介导的蛋白连接（IPL）流程图。

表 1：IMPACT 载体及其应用。

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：大肠杆菌
^a实际切割效率取决于临近的残基和融合蛋白的折叠。^bDTT 仅用于蛋白纯化。MESNA 可以使分离的蛋白拥有一个 C-末端的巯酯键，可用于连接、标记和环化。^c 半胱氨酸可用来替代 DTT。

iMPACT 试剂盒组成

– 大肠杆菌表达载体：pTXB1、pTYB21 和 pMXB10 对照载体

– 几丁质珠：纯化融合蛋白的亲和基质（结合容量 = 2 mg/ml）

– 抗 CBD 单克隆抗体
– DTT 与 SDS 上样缓冲液

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关于本产品特点与应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

NEB代理,Quick-Load 紫色1 kb DNA Ladder,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load 紫色 1 kb DNA Ladder

#N0552L375 gel lanes

#N0552S125 gel lanes

优点

• 直接上样

• 25℃ 条件下稳定

• 条带亮度均一

• 易于识别的参照带
• 样品粗略定量

概述

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理,RNA 试剂,DNase I,无 RNase

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

DNase I（无 RNase）

#M0303L 5,000 units

#M0303S 1,000 units

特性

·转录反应后 DNA 模板的降解

·除去 RNA 样品中的基因组 DNA 污染

·DNase I 印迹分析

·切刻平移

概述

DNase I（无 RNase）是一种非特异性核酸内切酶，切割 DNA 产生具有 3´ 羟基和 5´ 磷酸末端的二核苷酸、三核苷酸和寡核苷酸产物。DNase I 可以作用于单链 DNA、双链 DNA、染色质和 RNA:DNA 杂交链。

来源

重组 E. coli 菌株，含有牛胰腺 DNase I 的 MBP 融合克隆。

反应条件

1X DNase I 反应缓冲液

[10 mM Tris-HCl (pH 7.6 @ 25℃) ，2.5 mM MgCl₂，0.5 mM CaCl₂]，37℃ 温育。
热失活：75℃ 10 分钟。

质保声明

无 RNase 污染。

单位定义

1 单位指 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，10 分钟完全分解 1 μg pBR322 DNA 所需要的酶量。
完全降解是指绝大多数的 DNA 片段降解成为四核苷酸或更短的核苷酸。

浓度

2,000 units/ml。

注意事项

为避免酶失活过程中 RNA 被降解，应添加终浓度为 5 mM 的 EDTA。

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NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,pTYB21 载体,#N6709S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

pTYB21 载体

#N6709S 10 μg

特性

 单柱纯化且无需使用蛋白酶

 目的蛋白质不含来自载体的氨基酸

 可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端

概述

IMPACT（Intein Mediated Purificaiton with an Affinity Chitin-binding Tag）试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件（内含肽）进行一步亲和纯化重组蛋白（图1）。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于：无需蛋白酶作用，即可将重组蛋白与其亲和标签（Tag）分离。

pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母（Sce）VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。

图 2：IMPACT 系统流程图

图 3：内含肽介导的蛋白连接（IPL）流程图。

表 1：IMPACT 载体及其应用。

iMPACT 试剂盒组成

– 大肠杆菌表达载体：pTXB1、pTYB21 和 pMXB10 对照载体

– 几丁质珠：纯化融合蛋白的亲和基质（结合容量 = 2 mg/ml）

– 抗 CBD 单克隆抗体
– DTT 与 SDS 上样缓冲液

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关于本产品特点与应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。

NEB代理,Quick-Load 紫色 50 bp DNA Ladder,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load 紫色 50 bp DNA Ladder

#N0556S125–250 gel lanes

特性

 直接上样

 25℃ 条件下稳定

 条带亮度均一

 易于识别的参照带

 样品粗略定量

NEB 的 2-Log、1 kb 和 100 bp DNA Ladder 现均提供四种不同剂型。您可以选择常规型的 Ladder、以非荧光，紫色染料或者溴酚蓝为指示剂的 Quick-Load 型或含三种指示剂的 TriDye 型，便于观察DNA 迁移。

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,pTWIN1 载体#N6951S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

pTWIN1 载体

#N6951S 10 μg

Description:

pTWIN1 is an E. coli expression vector which can be used with the IMPACT™ Kit (NEB #E6901). pTWIN vectors are designed for protein purification or for the isolation of proteins with an N-terminal cysteine and/or a C-terminal thioester (1). A polylinker in the vector is designed for the in-frame fusion of a target gene between the modified Ssp DnaB (2) and Mxe GyrA inteins (3,4). The presence of the chitin binding domain from Bacillus circulans (5,6) facilitates purification. The double-stranded vector is 7,375 base pairs in length.

Features

A pBR322 derivative

The SapI sites should be used for directional cloning of both the 5´ and 3´ ends of an insert
Expression of the fusion gene is under the control of the T7 promotor (8) and is regulated by IPTG due to the presence of a lacI gene
Expression requires an E. coli host that carries the T7 RNA Polymerase gene [e.g., T7 Express Competent E. coli (High Efficiency) (NEB #C2566) or BL21(DE3) Competent E. coli (NEB #C2527) and derivatives] (9)
Origin of DNA replication from the bacteriophage M13 allows for the production of single-stranded DNA by helper phage superinfection of cells bearing the plasmid
Thiol-induced cleavage of the Mxe GyrA intein is dependent on the amino acids adjacent to the intein. The amino acid residues M or Y at the C-terminus of the target protein is recommended for use with this intein
Controllable cleavage of the Ssp DnaB intein is dependent on the amino acids adjacent to the intein. The amino acid residues CRA or GRA at the N-terminus of the target protein is recommended for use with this intein
Ampicillin resistance

Properties and Usage

Affinity Tag

Chitin-Binding Domain (CBD)

Storage Temperature

-20°C

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load 紫色低分子量 DNA Ladder

#N0557S125 gel lanes

特性

 直接上样

 25℃ 条件下稳定

 条带亮度均一

 易于识别的参照带

 样品粗略定量

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,pMAL-c5X 载体#N8108S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

pMAL-c5X 载体（停产，有替代）

#N8108S 10 μg

停产通知：

产品于2020 年 6 月 30 日停产，替代产品为：pMAL-c6T 载体（N0378）

概述

pMAL 载体用于 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统（NEB #E8200）。利用“P_tac”强启动子和 MBP 起始

翻译信号，目的基因与 malE 基因（编码 MBP 蛋白）融合表达。同时，它们含有与 NEB 其它表达系统

相兼容的多克隆位点。pMAL-c5 载体删除了malE信号序列，融合蛋白将在细胞质中表达。pMAL-p5X 载

体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜。pMAL-c5XHis 载体可以在其目的蛋白的 C – 末端

添加 6个his 标签。所有的载体都含有一段特异性蛋白酶识别位点序列，融合蛋白纯化后，通过蛋白酶可

将目的蛋白与 MBP 切割分离。[载体 pMALc5E含有一个肠激酶（NEB #P8070）的特异性切割位点；载

体 pMAL-c5X ，pMAL-p5X 和 pMAL-p5XHis含有一个 Factor Xa 蛋白酶（NEB #P8010）的特异性切割

位点.

浓度

145 ~ 240 μg/ml。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

关于本产品特点与应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375。

推荐用于测序的引物（不随产品提供）如下：

正向引物（24-mer，位于 malE 基因上游）
5´d(GGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCC)3´
反向引物（24-mer，位于多克隆位点下游）

5´d(TGTCCTACTCAGGAGAGCGTTCAC)3´

#N0558S NEB代理,TriDyeTM 低分子量 DNA Ladder,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

TriDye^TM低分子量 DNA Ladder

#N0558S 125-250 gel lanes

特性

 使用方便，可直接上样

 片段范围：10 bp 至 700 bp

 适用于非变性的聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶。

 配带的 TriDye 包含有 3 种肉眼可见示踪染料

 条带清晰易识别

 可上样 125 至 250 次

概述

TriDye™ 低分子量 DNA Ladder 是一种预混的并可直接上样的分子量标准品，含有三种肉眼可见示踪染料，用于监测非变性琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移进程。

这种 DNA Ladder 包含 10 bp 到 700 bp 范围的 13 个条带，其中大部分条带是通过用限制性内切酶消化专有质粒产生的。50 bp 和 300 bp 的条带为增加亮度的参考条带。该产品适用于非变性聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳。

推荐凝胶浓度：4％ TBE 琼脂糖，10％-20％ TBE 聚丙烯酰胺

TriDye 染料在电泳中的迁移*

*这些迁移率是近似的，并且可能随迁移条件（TAE/TBE 缓冲液，缓冲液 pH 值，电压等）而发生变化。

TriDye™ 低分子量 DNA Ladder 在 4％ TBE 琼脂糖凝胶和 20％ TBE 聚丙烯酰胺凝胶上的跑胶图。上样量为 0.5 μg/泳道。建议上样体积为：5-10 μl/泳道。

产品类别:

DNA Markers & Ladders 产品

应用:

DNA 检测

条带碱基数量

有效检测范围

10 bp 至 700 bp

储存温度

4℃

储存条件

10 mM Tris-HCl

10 mM EDTA

10% Glycerol

0.006% Xylene Cyanol

0.006% bromophenol blue

0.06% Orange G

pH 8.0 @ 25℃

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,pMAL-p5X 载体#N8109S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

pMAL-p5X 载体（停产）

#N8109S 10 μg

停产通知：

产品于2020 年 6 月 30 日停产

概述

pMAL 载体用于 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统（NEB #E8200）。利用“P_tac”强启动子和 MBP 起始

翻译信号，目的基因与 malE 基因（编码 MBP 蛋白）融合表达。同时，它们含有与 NEB 其它表达系统

相兼容的多克隆位点。pMAL-c5 载体删除了malE信号序列，融合蛋白将在细胞质中表达。pMAL-p5X 载

体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜。pMAL-c5XHis 载体可以在其目的蛋白的 C – 末端

添加 6个his 标签。所有的载体都含有一段特异性蛋白酶识别位点序列，融合蛋白纯化后，通过蛋白酶可

将目的蛋白与 MBP 切割分离。[载体 pMALc5E含有一个肠激酶（NEB #P8070）的特异性切割位点；载

体 pMAL-c5X ，pMAL-p5X 和 pMAL-p5XHis含有一个 Factor Xa 蛋白酶（NEB #P8010）的特异性切割

位点。

浓度

145 ~ 240 μg/ml。

上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375

关于本产品特点与应用的上海金畔生物科技有限公司官网，NEB代理，订购热线：18301939375请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。

推荐用于测序的引物（不随产品提供）如下：

正向引物（24-mer，位于 malE 基因上游）
5´d(GGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCC)3´
反向引物（24-mer，位于多克隆位点下游）

5´d(TGTCCTACTCAGGAGAGCGTTCAC)3´

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术,Xa 因子蛋白酶,#P8010L

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

Xa 因子蛋白酶

#P8010L 250 μg

#P8010S 50 μg

#P8010V 25 μg

识别位点

概述

Xa 因子蛋白酶的常见切割位点位于 Ile-(Glu/Asp)-Gly-Arg 序列中的精氨酸残基之后。根据蛋白质底物构象的不同，Xa 因子蛋白酶有时也可在其它碱性氨基酸残基处进行切割。在这些已经测序的次级识别位点中，最常见是 Gly-Arg 序列。在 E.coli 中不稳定的蛋白质和被 Xa 因子次级识别位点切割的蛋白质之间似乎存在某种相关性；这似乎表明这些蛋白是处于部分未折叠的状态。Xa 因子蛋白酶不切割位于脯氨酸或精氨酸之前的氨基酸位点。

来源

Xa 因子蛋白酶是从牛血浆纯化得到，并经鲁塞尔（Russell）喹蛇毒液中的活化酶活化处理。

分子量

Xa 因子的主要形式分子量约为 43 kDa，包含两条由二硫键相连的 27 kDa 和 16 kDa 的肽链。SDS-PAGE 电泳时，还原条件下两条链的分子量分别显示为 30 kDa 和 20 kDa。

单位定义

在 6 小时或更短时间内，1 μg 的 Xa 因子能够使 50 μg 测试底物实现 95% 的切割，单位检测条件请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。

浓度

1 mg/ml。

清除

Xa 因子能与苯甲脒-琼脂糖（如：GE Life Science #17-5143-02）发生特异性结合而被清除。

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NEB代理,1 kb Plus DNA Ladder,用于安全染料凝胶#N0559S

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

1 kb Plus DNA Ladder，用于安全染料凝胶

#N0559S 125-250 gel lanes

特性

针对 GelRed®，GelGreen® 和 SYBR™ Safe™ 琼脂糖预制凝胶进行了可视化优化（有关详细信息，请参阅下面的产品说明）
使用方便，可直接上样
片段范围：100 bp 至10 kb（100 bp 和 1 kb的 DNA Ladder 合二为一！）
条带清晰易识别
可上样 125 至 250 次

概述

1 kb Plus DNA Ladder，用于安全染料凝胶，是一种预混的并可直接上样的分子量标准品，含有一种肉眼可见示踪染料。它已针对 GelRed®，GelGreen® 和 SYBR™ Safe™ 琼脂糖预制凝胶进行了优化。

1 kb Plus DNA Ladder，用于安全染料凝胶，由专有质粒经限制性内切酶消化后产生的 19 条带组成,适用于琼脂糖凝胶电泳分子量的标准条带。消化的 DNA 片段范围从 100 bp 至 10 kb。其中 0.5、1.0 和3.0 kb 条带为增加亮度的参考条带。

 推荐凝胶浓度：1-1.4％

 胶浓度为 1.2％时分离效果最佳

1 kb Plus DNA Ladder，用于安全染料凝胶，在1.0％ TBE 琼脂糖 GelRed 预制胶中的电泳条带。上样量为 0.5 μg/泳道。建议上样体积为：5 至 10 μl/泳道。

产品类别:

DNA Markers & Ladders 产品

应用:

DNA 检测

条带碱基数量

有效检测范围

100 bp 至 10002 bp

储存温度

4℃

储存条件

5 mM Tris-HCl

5 mM EDTA

5% Glycerol

0.002% Xylene Cyanol

pH 8.0 @ 25℃

N3200L NEB代理,Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质),1 kb Plus DNA Ladder

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

1 kb Plus DNA Ladder

#N3200L 500–1,000 gel lanes

#N3200S100–200 gel lanes

#N3200V50–100 gel lanes

特性

NEB 为琼脂糖凝胶电泳提供一系列分子量从 25 bp 到 48.5 kb 的 DNA Ladder。

 室温稳定

 条带清晰均一

 易于识别的参照带

 提供一管凝胶上样染料，紫色（6X）

 样品粗略定量

（每条带质量详见 www.neb.com）

浓度

2-Log 和 50 bp 的 DNA Ladders 为 1,000 μg/ml。1kb、100 bp 和低分子量 DNA Ladder 为 500 μg/ml。PCR Marker 为 300 μg/ml。Fast DNA Ladder 为 25μg/ml，并且是可以直接上样的形式。

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理,烟草蚀纹病毒蛋白酶-TEV,表达系统,大肠杆菌

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

烟草蚀纹病毒蛋白酶（TEV）TEV Protease

#P8112S1,000 units

概述

TEV 蛋白酶也称烟草蚀纹病毒蛋白酶，是一种高度特异性的半胱氨酸蛋白酶，可识别氨基酸序列 Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-（Gly/Ser）并在 Gln 和 Gly/Ser 之间切割。常用于从融合蛋白中去除亲和纯化标签，例如麦芽糖结合蛋白（MBP）或多组氨酸。为了方便纯化烟草蚀纹病毒蛋白酶（TEV）携带 7xHis标签，可以使用镍亲和树脂轻松去除，该酶经生物工程改造具有更高的性能

来源

克隆自烟草蚀纹病毒（Tobacco Etch Virus），在 E. coli 中表达。

分子量

28,000 daltons

单位定义

1 单位指 10 μl 反应体系中，30℃ 条件下，1 小时内将 2 μg MBP-融合蛋白（MBP5-TEV-paramyosin ΔSal），达到 95％的切割所需的酶量，反应缓冲液含量如下：0.5 mM EDTA 和 1mM DTT 的 50 mM Tris-HCl（pH 7.5，25℃）

浓度

10,000 units/ml

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成,T7 RNA 聚合酶-高浓度,#M0460T

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

T7 RNA 聚合酶（高浓度）

#M0460T 50,000 units

浓度

1,000,000 units/ml

特性

使用 T7 噬菌体启动子进行体外转录

该产品为高浓度版本的 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）

适用于有经验的体外转录用户

随产品提供 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁

概述

T7 RNA 聚合酶（高浓度）的浓度为标准 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）的 20 倍，是希望自己建立和优化体外转录反应体系的有经验用户的理想选择。该酶配有 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁溶液，可进一步调试不同条件，例如核苷酸浓度。

对于标准 RNA 合成和高产量反应，我们推荐使用 T7 RNA 聚合酶（NEB＃M0251）和 HiScribe™ 试剂盒。HiScribe 试剂盒特别适合在短时间内以最少的优化，合成出高质量、高产量的 RNA。

体外转录除了 T7 RNA 聚合酶外还涉及多种成分，包括核糖核苷酸、无机焦磷酸酶和 RNase 抑制剂，这些均可单独购买。详细信息请参考“相关产品”部分。如需更多转录优化方案，请参阅相关文献。

噬菌体 T7 RNA 聚合酶是一种 DNA 依赖性 RNA 聚合酶，对 T7 噬菌体启动子具有高度特异性。该酶的分子量为 99 kD，它以 T7 启动子后的 DNA 序列为模板催化体外 RNA 合成。使用 T7 RNA 聚合酶合成的 RNA 适用于科研和生物技术的诸多应用。

产品来源

来源于 E.coli 菌株，携带 T7 RNA 聚合酶基因。

随产品提供的试剂

	储运温度(°C)	浓度
RNAPol Reaction Buffer	-20	10 X
MgCl₂ solution		0.2 M

产品类别：miRNA & siRNA 产品、RNA 相关试剂

应用：RNA 分析，体外合成（IVT）

特色应用

mRNA 用于体外翻译和显微注射

放射标记的 RNA 探针

非同位素 RNA 标记

制备 RNA 疫苗

靶基因的向导 RNA

RNA 的结构、加工以及催化作用的研究

基因表达实验中的反义 RNA

RNA 扩增

等温扩增

NEB代理,#N3231L,100 bp DNA Ladder

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

100 bp DNA Ladder

#N3231L500 gel lanes

#N3231S100 gel lanes

#N3231V50 gel lanes

特性

NEB 为琼脂糖凝胶电泳提供一系列分子量从 25 bp 到 48.5 kb 的 DNA Ladder。

 室温稳定

 条带清晰均一

 易于识别的参照带

 提供一管凝胶上样染料，紫色（6X）

 样品粗略定量

（每条带质量详见 www.neb.com）

浓度

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成,yDcpS #M0463S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

yDcpS

#M0463S 20 µl (4,000 U)

特性

* mRNA 帽结构去除，可用带标记的 GTP 类似物进行重新加帽

* 初级转录本 5’ 末端的生物素修饰

* Recappable-seq

概述

yDcpS 是脱帽酶，来源于酿酒酵母（S. cerevisiae），可水解 mRNAm7G 帽结构中 gamma 和 beta 位磷酸基团之间的磷酸二酯键，产物为二磷酸化的 5’末端和 m7GMP。yDcpS 可使全长 mRNA 脱帽，留下的 5’二磷酸末端可用牛痘病毒加帽酶重新加帽。

反应条件

1X yDcpS 反应缓冲液，37℃ 温育。

浓度

200,000 units/ml

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,NEBExpress® E. coli 裂解试剂

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

NEBExpress^® E. coli 裂解试剂 #P8116L500 ml

#P8116S100 ml

产品概述

NEBExpress^® E. coli 裂解试剂是化学裂解溶液，由专有的非离子和两性离子去垢剂以及 Tris 缓冲液组成，可用于破碎 E. coli 细胞，而不会降解或变性其内的可溶性蛋白。

·即用型溶液，在室温条件下稳定；

·溶于 Tris 缓冲液中的去垢剂活性强且温和；

·裂解反应可以从小量细菌放大到大量细菌，兼容于高通量工作流程；

·适用于蛋白提取，特别是容易受到机械裂解损伤的热敏感蛋白；

·与以下分析兼容：SDS-PAGE、Western Blot、活性测定、免疫沉淀和下游纯化等；

·适用于破碎大多数革兰氏阴性细菌细胞。

产品组分与保存条件

货号	名称	保存温度（°C）	体积	浓度
P8116S	NEBExpress^® E. coli 裂解试剂	25	1 x 100 ml	1 x
P8116L	NEBExpress^® E. coli 裂解试剂	25	5 x 100 ml	1 x

NEB代理,1 kb DNA Ladder#N3232L,Markers 和 Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

1 kb DNA Ladder

#N3232L1,000 gel lanes

#N3232S200 gel lanes

#N3232V100 gel lanes

特性

NEB 为琼脂糖凝胶电泳提供一系列分子量从 25 bp 到 48.5 kb 的 DNA Ladder。

 室温稳定

 条带清晰均一

 易于识别的参照带

 提供一管凝胶上样染料，紫色（6X）

 样品粗略定量

（每条带质量详见 www.neb.com）

浓度

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,Hi-T7 RNA 聚合酶-高浓度,#M0470T

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

Hi-T7 RNA 聚合酶（高浓度）

#M0470T 50,000 units

特性

Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶适合在较高温度下进行体外转录，在 37-56℃ 有活性

使用 T7 噬菌体启动子进行体外转录

该产品为高浓度版本的 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（NEB＃M0658）

使用帽类似物时，提高共转录的加帽效率

由于减少了 dsRNA 副产物的形成，从而使高温合成 RNA 的免疫原性降低

适用于有经验的体外转录用户

随产品带有 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁

概述

Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（高浓度）的浓度为标准 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（NEB＃M0658）的 20 倍，是希望自己建立和优化体外转录反应体系的有经验用户的理想选择。该酶配有 Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶反应缓冲液和氯化镁溶液，可进一步调试不同条件，例如核苷酸浓度。

体外转录除了 RNA 聚合酶外还涉及多种成分，包括核糖核苷酸、无机焦磷酸酶和 RNase 抑制剂，这些均可单独购买。详细信息请参考“相关产品”部分。

Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶是一种经基因工程改造的 DNA 依赖性 RNA 聚合酶，对 T7 噬菌体启动子具有高度特异性，跟野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比，它可在更高的温度下进行反应。Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶的最佳温度为 50-52°C。

在更高的体外转录反应温度下，Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶（高浓度）减少了 dsRNA 副产物

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

使用 dsRNA 抗体（J2）进行免疫印记实验显示：在 37℃ 进行体外转录实验时，T7 和 Hi-T7 的转录产物均含有 dsRNA 副产物，HPLC 纯化可消除体外转录 RNA 中的 dsRNA 副产物。在 50℃ 条件下使用 Hi-T7 进行体外转录实验时，dsRNA 副产物明显减少。

产品来源

来源于 E.coli 菌株，携带经基因工程改造的 T7 RNA 聚合酶基因。

随产品提供的试剂

	储运温度(°C)	浓度
Hi-T7^® RNA Polymerase Reaction Buffer	-20
MgCl₂ solution		0.2 M

产品类别： RNA 相关试剂、RNA 合成产品

应用：RNA 分析，体外合成（IVT）

特色应用

mRNA 用于体外翻译、显微注射以及转染

放射标记的 RNA 探针

非同位素 RNA 标记

靶基因的向导 RNA

RNA 的结构、加工以及催化作用的研究

基因表达实验中的反义 RNA

RNA 扩增

等温扩增

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,大肠杆菌,NEBExpress™ 镍离心柱

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

NEBExpress™ 镍离心柱

#S1427L25 columns

#S1427S10 columns

特性

 包括即用型预装镍离心柱和纯化所需的所有缓冲液

 每个离心柱可纯化≥1 mg His 标记的蛋白，仅需 15 分钟

 高特异性结合带有组氨酸标签的蛋白质，分离纯化后纯度>95％

 牢固的镍离子结合使其对 EDTA 和还原剂有极好的耐受性。与市场上基于去污剂的细胞裂解试剂兼容

 可在天然或变性条件下分离和纯化组氨酸标签蛋白

概述

镍离心柱包含亲和基质，用于小规模分离和纯化带有多组氨酸标签（His 标签）的融合蛋白。使用 NEBExpress™ 镍离心柱进行固定化金属亲和层析（IMAC）可以在天然或变性条件下进行纯化，从而一步纯化即可获得高纯度的蛋白质。使筛选表达条件及简化靶蛋白的功能和结构研究成为可能。

支持基质：

球形，基于琼脂糖的微粒，尺寸为 10-100 μm。

图1：NEBExpress™ 镍离心柱快速使用指南

图2：使用 NEBExpress™ 镍离心柱纯化 His 标记的融合蛋白

平衡 NEBExpress 镍离心柱，并加入 500 μl 大肠杆菌粗提物，其中含有表达 His₆-GluRS 或 His₆-NDK 融合蛋白的质粒。经洗涤、洗脱、跑 SDS-PAGE 胶检测，以确认靶蛋白的高度分离和极地的非特异性蛋白结合。Marker（M）包含彩色预染蛋白 Standard（NEB＃P7719），第 1 道：GluRS 蛋白质上样液，第 2 道：GluRS 经流液，第 3 道：GluRS 第一次洗脱，第 4 道：GluRS 第二次洗脱，第 5 道：NDK 蛋白质上样液，第 6 道：NDK 经流液，第 7 道：NDK 第一次洗脱，第 8 道：NDK 第二次洗脱。

随产品提供的试剂：

	储存温度(°C)	浓度
2X IMAC Buffer	4	2 X
2M Imidazole		2 M

产品类别：树脂、磁珠和磁力架产品、蛋白表达和纯化产品

应用：标记蛋白的表达，偶联蛋白的表达和纯化

储存温度：4°C

储存条件：20% 乙醇

Binding Capacity

Varies with target, ≥ 1 mg His-tagged fusion protein per column.

结合能力：结合量随靶标变化，每个柱子可结合≥1 mg 带有His标签的融合蛋白

#N3233L NEB代理,Markers 和 Ladders,低分子量 DNA Ladder

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

低分子量 DNA Ladder

#N3233L500 gel lanes

#N3233S100 gel lanes

#N3233V50 gel lanes

特性

NEB 为琼脂糖凝胶电泳提供一系列分子量从 25 bp 到 48.5 kb 的 DNA Ladder。

 室温稳定

 条带清晰均一

 易于识别的参照带

 提供一管凝胶上样染料，紫色（6X）

 样品粗略定量

浓度

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,E. coli RNA 聚合酶,核心酶 #M0550S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

E. coli RNA 聚合酶，核心酶

#M0550S 100 units

特性

 E. coli 启动子启动的 RNA 合成

 转录起始研究

 PURExpress 体外转录

概述

E. coli RNA 聚合酶，核心酶由 5 种亚基组成，分别为 α、α、β´ 、β、和 ω。此酶无 σ 因子，因此不会对细菌和噬菌体 DNA 启动子特异性启动转录。本酶保留了从非特异性启动序列转录 RNA 的功能。添加 σ 因子后，本酶可从特定细菌和噬菌体的特异启动子启动合成 RNA。核心酶分子量约 400 kDa。

E. coli RNA 聚合酶，全酶由核心酶和 σ 因子 70 组成，能从 σ 因子 70 特定的细菌和噬菌体启动子处起始合成RNA。

来源

大肠杆菌 RNA 聚合酶，核心酶是由大肠杆菌 BL21 分离而得。σ 因子 70 是由携带 σ 因子 70 克隆基因的大肠杆菌纯化而来。

反应条件

40 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM KCl，10 mM MgCl₂，0.01% Triton-X-100，1 mM DTT，每种 rNTP 各 0.5 mM 和 DNA 模板。37℃ 温育。

质保声明

无 DNA 内、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位是指在 37℃ 条件下，10 分钟内可将 1 nmol NTP 掺入 RNA 所需的酶量。

浓度

1,000 units/ml。

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,NEBExpress™ 镍柱填料#S1428S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

NEBExpress™ 镍柱填料

#S1428S 25 ml

特性

每 1 ml 镍柱填料可纯化≥10 mg 组氨酸标签蛋白

用于重力或压力液流柱以及批量纯化

高特异性结合带有组氨酸标签的蛋白质，分离和纯化后纯度>95％

牢固的镍离子结合使其对 EDTA 和还原剂有极高的耐受性。与市场上基于去污剂的细胞裂解试剂兼容

可在天然或变性条件下分离和纯化组氨酸标签蛋白

概述

NEBExpress™ 镍柱填料也有离心柱形式在售，NEB #S1427

NEBExpress™ 镍柱填料是一种亲和基质，用于分离和纯化带有多组氨酸标签（His 标签）的融合蛋白。该产品用于重力或压力液流柱以及批量纯化。NEBExpress 镍柱填料由高度均匀且稳定的耐化学性树脂组成，在基质表面上预包埋镍离子。它能耐受多种化学品，包括 NaOH，EDTA，DTT 和 β-巯基乙醇。

大批量订购需求了解更多信息，请联系 support@neb.com

支持基质：球形，基于琼脂糖的微粒，尺寸为 10-100 μm。

产品类别：树脂、磁珠和磁力架产品、蛋白表达和纯化产品

应用：标记蛋白的表达，偶联蛋白的表达和纯化

储存温度：4°C

储存条件：20% 乙醇

结合能力：1 ml NEBExpress™ 镍柱填料可结合≥10 mg 带有 His 标签的融合蛋白。

NEB代理,#N3234L,PCR Marker,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

PCR Marker

#N3234L500 gel lanes

#N3234S100 gel lanes

特性

NEB 为琼脂糖凝胶电泳提供一系列分子量从 25 bp 到 48.5 kb 的 DNA Ladder。

 室温稳定

 条带清晰均一

 易于识别的参照带

 提供一管凝胶上样染料，紫色（6X）

 样品粗略定量

浓度

2-Log 和 50 bp 的 DNA Ladders 为 1,000 μg/ml。1kb、100 bp 和低分子量 DNA Ladder 为 500 μg/ml。 PCR Marker 为 300 μg/ml。Fast DNA Ladder 为 25 μg/ml。

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,E. coli RNA 聚合酶,全酶, #M0551S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

E. coli RNA 聚合酶，全酶

#M0551S 50 units

特性

 E. coli 启动子启动的 RNA 合成

 转录起始研究

 PURExpress 体外转录

概述

E. coli RNA 聚合酶，核心酶由 5 种亚基组成，分别为 α、α、β´ 、β、和 ω。此酶无 σ 因子，因此不会对细菌和噬菌体 DNA 启动子特异性启动转录。本酶保留了从非特异性启动序列转录 RNA 的功能。添加 σ 因子后，本酶可从特定细菌和噬菌体的特异启动子启动合成 RNA。核心酶分子量约 400 kDa。
E. coli RNA 聚合酶，全酶由核心酶和 σ 因子 70 组成，能从 σ 因子 70 特定的细菌和噬菌体启动子处起始合成RNA。

来源

大肠杆菌 RNA 聚合酶，核心酶是由大肠杆菌 BL21 分离而得。σ 因子 70 是由携带 σ 因子 70 克隆基因的大肠杆菌纯化而来。

反应条件

40 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM KCl，10 mM MgCl₂，0.01% Triton-X-100，1 mM DTT，每种 rNTP 各 0.5 mM 和 DNA 模板。37℃ 温育。

质保声明

无 DNA 内、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

1 单位是指在 37℃ 条件下，10 分钟内可将 1 nmol NTP 掺入 RNA 所需的酶量。

浓度

1,000 units/ml。

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,表达系统:大肠杆菌,几丁质树脂

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：大肠杆菌

几丁质树脂

#S6651L 100 ml

#S6651S 20 ml

#S6651V 10 ml

Description:

An affinity matrix for the isolation of target proteins fused to an intein-chitin binding domain fusion (1）

Proterties and Usage

Storage Temperature
4°C

Binding Capacity

2.0 mg maltose-binding protein/ ml bed volume released from the resin after cleavage of the fusion protein expressed from pMYB5.

Can be Regenerated

Yes

NEB代理,#N3236L,50 bp DNA Ladder,DNA Ladders

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

50 bp DNA Ladder

#N3236L500–1,000 gel lanes

#N3236S100–200 gel lanes

#N3236V50–100 gel lanes

特性

NEB 为琼脂糖凝胶电泳提供一系列分子量从 25 bp 到 48.5 kb 的 DNA Ladder。

 室温稳定

 条带清晰均一

 易于识别的参照带

 提供一管凝胶上样染料，紫色（6X）

 样品粗略定量

（每条带质量详见 www.neb.com）

浓度

2-Log 和 50 bp 的 DNA Ladders 为 1,000 μg/ml。1kb、100 bp 和低分子量 DNA Ladder 为 500 μg/ml。 PCR Marker 为 300 μg/ml。Fast DNA Ladder 为 25 μg/ml。

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,DNase I-XT耐盐,#M0570L

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

DNase I-XT（耐盐）

#M0570L 5,000 units

#M0570S 1,000 units

产品特性

·耐盐型 DNA 特异性核酸内切酶

·用于降解双链和单链 DNA

·产生具有 5′-磷酸和 3′-羟基末端的短链寡核苷酸

·不含 RNase

DNase I-XT（耐盐）特别适用于：

·降解体外转录反应中的 DNA 模板

·去除 RNA 样品中残留的基因组 DNA

产品描述

DNase I-XT（耐盐）是基于 DNase I 改造的耐盐型 DNA 核酸内切酶，可非特异切割 DNA，产生具有 5′-磷酸和 3′-羟基末端的二核苷酸、三核苷酸和寡核苷酸产物 (1,2)。DNase I-XT（耐盐）作用于单/双链 DNA、染色体，以及 RNA:DNA 杂交链上的 DNA。当盐浓度>50 mM 时，不耐盐型 DNase I（无 RNase）（NEB #M0303）的活性会受到抑制，但 DNase I-XT（耐盐）（NEB #M0570）在 50-100 mM 盐浓度范围活性最佳，盐浓度达到 200 mM 时，可维持 65% 活性，300 mM 时，仍有~40% 活性。

图 1：DNase I-XT（耐盐）在盐浓度> 100 mM，能高效降解 DNA

在等摩尔的 DNase I (NEB #M0303) 和 DNase I-XT（耐盐）(NEB #M0570) DNase 活性比较中，DNase I-XT（耐盐）展示出更高的耐盐特性。检测方法为：在 1X DNase I 反应缓冲液中，消化标记有荧光和淬灭基团的发夹 dsDNA 底物（35 nt），荧光强度反映出不同盐浓度条件下的酶活（如图所示）。结果显示：DNase I 活性随着盐浓度的增加而下降，而耐盐的 DNase I-XT 在高达 300 mM 盐浓度中仍保持活性。

图 2：DNase I-XT（耐盐）能够更完全的去除 IVT 反应和 RNA 中的 DNA

20 μl 体外转录产物用以下三种方法检测去除残留 DNA 的效果：1) 无 DNase I；2) 2 U TURBO^® DNase 或 3) 2 U DNase I-XT（耐盐），37°C 条件下孵育 15 分钟。分别使用 Monarch RNA 纯化试剂盒（500 µg）（NEB #T2050）纯化，以无核酸酶水（50 µl）洗脱。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB #M3004）通过 qPCR 检测 DNA 残留水平。将每个样品的平均 Cq 值与标准曲线（灰色）进行比较，以评估可 PCR-扩增 DNA 的百分比。TURBO DNase 和 DNase I-XT（耐盐）的使用都不需要对 IVT 反应产物进行稀释，但是，DNase I-XT（耐盐）对 IVT 反应中的 DNA 模板去除更彻底，难以通过 qPCR 检测到。

图 3：DNase I-XT（耐盐）有效去除 RNA 粗提产物中的残留 DNA

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

RNA 粗提样本用以下四种方法检测去除残留 DNA 的效果：1) 无 DNase I；2) 在 DNase I-XT 反应缓冲液中加入 DNase I-XT（耐盐）(2 U, NEB #M0570)；3) 在 DNase I 反应缓冲液中加入 DNase I (2 U, NEB #M0303)；4) 在 TURBO DNase 反应缓冲液中加入 TURBO DNase (2 U, ThermoFisher) ，37°C 条件下孵育 15 分钟。使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒 (NEB #E3005) 和人类或小鼠 Actin 外显子引物，通过（+/- RT）qPCR 检测对残留的基因组 DNA (gDNA) 进行定量。以 qPCR（无反转录，仅扩增DNA）与 RT-qPCR（有反转录，同时扩增 DNA 和 RNA）平均 Cq 值的差值评估 DNase 去除 DNA 的效果。结果显示：对于 RNA 粗提产物中的残留 gDNA，DNase I-XT（耐盐）比 TURBO DNase 去除效果更彻底。

酵母碳基础培养基#B9017S,蛋白表达和纯化技术,表达系统:酵母

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：酵母

酵母碳基础培养基

#B9017S 12 g

特性

 可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因

 可同时表达多个基因

 无需昂贵的抗生素或甲醇

 易操作的实验步骤，适用于无酵母表达经验者
 有吸引力的商业授权

pKLAC2 载体限制性酶切图谱请参见 351 页

概述

K. lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合载体中，既可表达胞内蛋白，亦可表达分泌型蛋白。与其它酵母和细菌表达系统相比，K. lactis 蛋白表达系统有着诸多优点。首先，乳酸克鲁维酵母具有高培养密度及整合多拷贝质粒的能力，使其可成功制备大量的高表达蛋白质；其次，pKLAC1 系列载体使用强 LAC4 启动子，该启动子经修饰，在大肠杆菌中无背景表达，因此，可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达；再有，试剂盒提供高效转化的 K. lactis 感受态细胞，使得该系统适用于需要大量转化子的实验，比如利用 cDNA 文库进行表达克隆；另外，酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素，培养基中也不需要甲醇；最后，K. lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰，因而可成为细菌表达系统的有用替代。

pKLAC2 属于通用表达载体。利用这些载体既可使重组蛋白在细胞内表达，也能通过与 K. lactis α-factor 的融合实现分泌表达。pKLAC2 的多克隆位点与 NEB 其它表达系统相兼容。

GG799 是 K. lactis 蛋白表达试剂盒中提供的基础菌株。其特点是细胞生长密度与异源蛋白表达效率极高，GG799 细胞未经遗传修饰。

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：酵母
蛋白质的分泌过程。在细胞核中，整合表达载体编码了一个含有 ɑ-MF 结构域（蓝色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表达后，位于 ɑ-MF 上的信号肽就会指导融合蛋白转运至内质网（ER），信号肽即被信号肽酶（SP）切除。融合蛋白质转运至高尔基体，Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后，目的蛋白质被分泌到细胞外。

K. lactis 的蛋白表达。SDS-PAGE 电泳分离检测分泌性表达的重组麦芽糖结合蛋白（MBP），菌体生长在富含蛋白胨（peptone）的培养基中，直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 细胞培养液（15 μl）；泳道 3：整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K. lactis 细胞培养液（15 μl）。

K. lactis 蛋白表达试剂盒包括

– pKLAC2 载体和 pKLAC1-malE 对照质粒

– SacII

– 整合测序引物套装

– K. lactis GG799 感受态细胞和转化试剂
– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液

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NEB代理,Fast DNA Ladder,#N3238S,NEB琼脂糖凝胶电泳

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Fast DNA Ladder

#N3238S50–200 gel lanes

特性

NEB 为琼脂糖凝胶电泳提供一系列分子量从 25 bp 到 48.5 kb 的 DNA Ladder。

 室温稳定

 条带清晰均一

 易于识别的参照带

 提供一管凝胶上样染料，紫色（6X）

 样品粗略定量

浓度

2-Log 和 50 bp 的 DNA Ladders 为 1,000 μg/ml。1kb、100 bp 和低分子量 DNA Ladder 为 500 μg/ml。 PCR Marker 为 300 μg/ml。Fast DNA Ladder 为 25 μg/ml。

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,mRNA 脱帽酶,#M0608S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

mRNA 脱帽酶

#M0608S 2,000 U

特性

mRNA 脱帽酶可使带有 m⁷G 帽结构的 mRNA 脱帽，产生 5’单磷酸末端。

·有效替代烟草酸焦磷酸酶（TAP）

·去除 Cap 0 和 Cap 1 的效率相同

·适用于 5’RLM-RACE 和 RNA-seq

·1 µl 的酶可在 15 min 内将 20 µg 的 mRNA（1.7 kb）完成脱帽

产品信息

mRNA 脱帽酶可以将 mRNA 5’末端的 7-甲基鸟苷帽（m⁷G）结构去除，产生 5’单磷酸末端并释放 m⁷GDP。mRNA 脱帽酶能够使各种长度的 mRNA 脱帽，对 Cap 0 和 Cap 1 的去除效率相同。mRNA 脱帽酶也可将 5’三磷酸末端转化为 5’单磷酸，但转化效率相对较低。5’单磷酸化的 RNA 可用于多种下游应用，包括 5’RNA 连接酶介导的 RACE、RNA-seq 和 5’→3’核酸外切酶消化。

mRNA 脱帽酶（MDE）和烟草酸焦磷酸酶（TAP）脱帽活性的比较

（图 A）用 mRNA 脱帽酶（MDE）或其它品牌的烟草酸焦磷酸酶（TAP）对 500 nM 的 5’加帽 RNA（25 nt）溶液进行脱帽反应。每种酶使用各自适合的反应缓冲液，且反应体积相同。其它品牌的 TAP 浓度未知，经比较显示 0.3 nM 的 MDE 与 1 µl 的 TAP 活性相当。脱帽反应后的反应产物使用毛细管电泳分析。需要注意的是，在阴性对照中，所用的合成底物中都存在 10％的三磷酸 RNA。（图 B）测试了在其它条件不变的情况下，引入不同长度、不同种类末端的 RNA，是否会影响 MDE 的活性，在反应中添加 500 ng Jurkat 细胞总 RNA。结果显示：MDE 的脱帽活性不受影响，而 TAP 活性则显着降低，这说明 MDE 的脱帽能力在该测试条件下更稳定。

随酶提供的试剂

	储存温度 (°C)	浓度
mRNA Decapping Enzyme Reaction Buffer

储存温度

-20°C

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,表达系统:酵母,K. lactis GG799 感受态细胞#C1001S

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：酵母

K. lactis GG799 感受态细胞

#C1001S 5 次反应

特性

 可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因

 可同时表达多个基因

 无需昂贵的抗生素或甲醇

 易操作的实验步骤，适用于无酵母表达经验者
 有吸引力的商业授权
pKLAC2 载体限制性酶切图谱请参见 351 页

概述

GG799 是 K. lactis 蛋白表达试剂盒中提供的基础菌株。其特点是细胞生长密度与异源蛋白表达效率极高，GG799 细胞未经遗传修饰。

NEB代理 , 蛋白表达和纯化技术 , 表达系统：酵母
K. lactis 的蛋白表达。SDS-PAGE 电泳分离检测分泌性表达的重组麦芽糖结合蛋白（MBP），菌体生长在富含蛋白胨（peptone）的培养基中，直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 细胞培养液（15 μl）；泳道 3：整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K. lactis 细胞培养液（15 μl）。

K. lactis 蛋白表达试剂盒包括

– pKLAC2 载体和 pKLAC1-malE 对照质粒

– SacII

– 整合测序引物套装

– K. lactis GG799 感受态细胞和转化试剂
– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液

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NEB代理,#N3239S,Quick-Load 1 kb Extend DNA Ladder

产品资料 – Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) – DNA Ladders

Quick-Load 1 kb Extend DNA Ladder

#N3239S125 gel lanes

特性

• 直接上样

• 25℃ 条件下稳定

• 条带亮度均一

• 易于识别的参照带

• 样品粗略定量

概述

NEB代理 , Markers 和 Ladders (DNA/RNA 和蛋白质) , DNA Ladders

NEB代理,RNA 试剂,RNA 合成,Hi-T7 RNA 聚合酶,#M0658S

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

Hi-T7 RNA 聚合酶

#M0658S 5,000 units

特性

NEB代理 , RNA 试剂 , RNA 合成

反应条件

1X RNAPol 反应缓冲液。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP（不随酶提供）和带有启动子的模板 DNA。于 37℃（ T3、T7 和 SP6 ）或 50℃（Hi-T7）条件下温育。

概述

T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体，可将目的基因序列克隆到T3、 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中，以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。

Hi-T7 RNA 耐热聚合酶是经基因工程改造的热启动 T7 RNA 聚合酶。Hi-T7 使用 T7 RNA 聚合酶启动子。在合成过程中，可提高加帽效率并消除 dsRNA 副产物的产生。

单位定义

1 单位指在 37℃或 50℃（Hi-T7）条件下，1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或www.neb.com。

浓度

T3 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶：20,000 units/ml； Hi-T7 耐热 RNA 聚合酶：50,000 units/ml。

NEB代理,蛋白表达和纯化技术,K. lactis 蛋白表达试剂盒

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统：酵母

K. lactis 蛋白表达试剂盒

#E1000S 1 set

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特性

 可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因

 可同时表达多个基因

 无需昂贵的抗生素或甲醇

 易操作的实验步骤，适用于无酵母表达经验者
 有吸引力的商业授权

pKLAC2 载体限制性酶切图谱请参见 385 页

概述

K. lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合载体中，既可表达胞内蛋白，亦可表达分泌型蛋白。与其它酵母和细菌表达系统相比，K. lactis蛋白表达系统有着诸多优点。首先，乳酸克鲁维酵母具有高培养密度及整合多拷贝质粒的能力，使其可成功制备大量的高表达蛋白质；其次，pKLAC1 系列载体使用强 LAC4 启动子，该启动子经修饰，在大肠杆菌中无背景表达，因此，可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达。另外，酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素，培养基中也不需要甲醇。最后，K. lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰，因而可成为细菌表达系统的有用替代。

pKLAC2 属于通用表达载体。利用这些载体既可使重组蛋白在细胞内表达，也能通过与 K. lactis α-mating factor(MF) 的融合实现分泌表达。pKLAC2的多克隆位点与 NEB 其它表达系统相兼容。

GG799 是 K. lactis 蛋白表达试剂盒中提供的基础菌株。其特点是细胞生长密度与异源蛋白表达效率极高，GG799 细胞未经遗传修饰。

蛋白质的分泌过程。在细胞核中，整合表达载体编码了一个含有 α-MF 结构域（蓝色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表达后，位于 α-MF 上的信号肽就会指导融合蛋白转运至内质网（ER），信号肽即被信号肽酶（SP）切除。融合蛋白质转运至高尔基体，Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后，目的蛋白质被分泌到细胞外。

K.lactis的蛋白表达。SDS-PAGE 电泳分离检测分泌性表达的重组麦芽糖结合蛋白（MBP），菌体生长在富含蛋白胨（peptone）的培养基中，直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 细胞培养液（15 μl）；泳道 3：整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K. lactis细胞培养液（15 μl）。

K. lactis 蛋白表达试剂盒包括

– pKLAC2 载体和 pKLAC1-malE 对照质粒

– SacII

– 整合测序引物套装

– K. lactis GG799 感受态细胞和转化试剂

– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液

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