Dojindo,Cell Counting Kit-F/500/CK06,细胞计数试剂盒

2022年4月30日 作者 jinpanbio
Cell Counting Kit-F(CCK-F) 用于活细胞数量的荧光测定。 细胞中被酯酶水解的荧光染料钙黄绿素的量与培养基中活细胞的数量成正比(图 1)。 由于培养基中的酯酶和酚红会干扰荧光测量,因此在添加 Calcein-AM 测定溶液之前,必须用 PBS 替换细胞培养基。 钙黄绿素的激发和发射波长分别为 485 nm 和 535 nm(图 3)。 10 到 30 分钟的孵育为细胞活力测定提供了足够的荧光强度。
使用标准 96 孔板时,每孔(100 μl 培养基)至少需要 50 个细胞。但是,我们建议每孔至少使用 1,000 个细胞,以获得更可靠和一致的数据。
钙黄绿素会染色活细胞吗?
是的,钙黄绿素留在细胞内。可以使用荧光显微镜观察活细胞。如果需要更长的观察期,请尝试 CFSE(产品代码:C375-10)。

酚红会影响检测吗?
是的。在向板中添加分析溶液之前需要进行洗涤过程。只有 PBS 的孔也有相当高的荧光背景,因此有必要从总荧光中减去背景荧光。

我可以使用该试剂盒进行细菌细胞计数吗?
不可以。Calcein-AM 不能穿过细菌细胞壁,因此无法使用该试剂盒对它们进行染色。

CCK-F 检测溶液稳定吗?
不会。CCK-F 中的 Calcein-AM 在 PBS 中很容易水解。仅为实验准备所需体积的测定溶液。

CCK-F 与胸苷掺入测定之间是否存在相关性?
是的。但是,请注意,由于 CCK-F 使用与胸苷检测不同的检测机制,结果可能会有所不同。比较数据显示在技术手册中,该手册可从 www.dojindo.com/tm 获得。

CCK-F 检测溶液对细胞有毒吗?
由于检测溶液是用 PBS 制备的,因此某些细胞可能会受到 PBS 的影响。此外,钙黄绿素与细胞中的钙离子结合,因此游离钙离子的减少会对细胞功能造成一些损害。

我还可以使用哪些其他过滤器?
您可以使用 460 nm 和 490 nm 之间的激发滤光片和 510 nm 和 540 nm 之间的发射滤光片。

我可以将 CCK-F 用于 384 孔板吗?
通过将 5 μl(而不是 10 μl)CCK-F 测定溶液添加到每孔 50 μl PBS 溶液中,CCK-F 可用于 384 孔板。