Dojindo,BMPO/50/B568,BMPO 是作为一种自旋捕集试剂开发
2022年4月29日通用协议测量芬顿反应中的羟基自由基1。用 5 ml ddH2O.2 溶解 1.5 mg BMPO。将 15 μl BMPO 溶液、75 μl 1 mM H2O2 和 75 μl 100 μM FeSO4 添加到 50 μl ddH2O.3 中。将溶液转移到 ESR 样品管中，并在一定时间后测量 ESR 光谱，例如1分钟.4。从峰高计算相对强度。测量黄嘌呤氧化酶 (XO) 反应中的超氧自由基1。用 1 ml 50 mM 磷酸盐缓冲液 (pH7.4).2 溶解 1 mg BMPO。制备含有 1 mM DTPA 和 0.4 mM Xanthine.3 的 50 mM 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)。制备含有 0.1 U/ml 黄嘌呤氧化酶 4 的 50 mM 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）。混合 15 μl 溶液 A、135 μl 溶液 B 和 10 μl 溶液 C.5。将溶液转移到 ESR 样品管中，并在一定时间后测量 ESR 光谱，例如8 分钟。 6。从峰高计算相对强度。
Experimental Data from Bruker >> Download the detail (PDF)Superoxide Detection
协议 1。 制备含有 25 μM 二乙烯三胺五乙酸 (DTPA) 作为过渡金属螯合剂的 100 mM 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4) 溶液。2。 在 100 mM 磷酸盐缓冲液中配制 1 mM 次黄嘌呤溶液，pH 7.4.3。 配制浓度为 1 单位/ml4 的黄嘌呤氧化酶溶液。 将 10 mg BMPO 溶解到 200 µl 磷酸盐缓冲液中（最终浓度应为 250 mM），配制 BMPO 溶液。5。 将您的反应混合物制备成总反应体积为 200 µl.6。 在 Eppendorf tube.7 中加入 70 µl 缓冲液。 加入 20 µl 的 250 mM BMPO 溶液和 100 µl 的 1 mM 原液次黄嘌呤溶液。8。 用 10 µl 黄嘌呤氧化酶启动反应，涡旋管子并将溶液转移到平板细胞中。9。 将扁平电池插入腔中，调整光谱仪，并获取光谱。
组分的最终浓度为：25 mM BMPO、0.5 mM 次黄嘌呤和 0.05 单位/ml 黄嘌呤氧化酶。
Hydroxyl radical detection
协议 1。配制 1 mM FeSO4、10 mM H2O2 和 250 mM BMPO 在水中的溶液。2。将您的反应混合物制备成总反应体积为 200 µl.3。向 Eppendorf 管中加入 140 µl 蒸馏水。4。添加 20 µl 250 mM BMPO 溶液和 20 µl FeSO4 原液 1 mM 溶液。5。用 20 µl 10 mM H2O2.6 启动反应。混合反应物并迅速将溶液转移到平板电池中。 7．将扁平电池插入腔中，调整光谱仪，并获取光谱。
组分的最终浓度为：25 mM BMPO、0.1 mM FeSO4 和 1 mM H2O2。给出了 BMPO 自旋捕获自由基的输出光谱。在 BMPO 的情况下，形成了 BMPO/OH 的两种立体异构体，类似于 BMPO/OOH 结果。两种 BMPO 加合物的构象 I 为 aN = 13.47 G、aHβ = 15.31 G 和 aHγ1 = 0.62 G，构象 II 为 aN = 13.56 G、aHβ = 12.3 G 和 aHγ1 = 0.66 G。
您应该始终执行排除一种或多种试剂的对照实验。这些实验将揭示任何顺磁性杂质，并将证明产生 EPR 信号所需的所有组件。
Time Course of the Superoxide Signal
Data and Protocol were kindly provided by Bruker Corporation.
After feeding the results of SpinFit into SpinCount, the concentration changes over the time of the experiment are obtained.
O2 的稳定性和反应数据。-DetectionBMPO 给出了不同实验条件下反应超氧化物的速率常数和相应自旋陷阱加合物的更长稳定性。链接到已发表论文
1. H. Zhao、J. Joseph、H. Zhang、H. Karoui 和 B. Kalyanaraman，固体环状硝酮自旋阱的合成和生化应用：用于检测超氧阴离子和谷胱甘肽的相对优越的阱。 自由基生物医学。 2001；31:599-606.2。 通用汽车 Rosen, P. Tsai, J. Weaver, S. Porasuphatana, L. Roman, A. A. Starkov, G. Fiskum 和 S. Pou，四氢生物蝶呤在调节神经元一氧化氮合酶产生的超氧化物中的作用。 J生物化学。 2002；277:40275-40280。
半衰期数据在 O2.- 检测中观察到长半衰期。
BMPO is applicable for experiments which requires longer handlin time. (ex. monitoring of enzyme reactions)